剪切力对动脉血管平滑肌细胞增殖分化的影响.pdfVIP

维普资讯 研究报告 生命科学仪器 2008第6卷，1月刊 剪切力对动脉血管平滑肌细胞增殖分化的影响 王 莹，樊瑜波，孙安强 (北京航空航天大学生物工程系，北京，100083，中国) 摘要 目的：探讨剪切力作用下人脐动脉血管平滑肌细胞的增殖分化的变化。 方法：利用改进的灌流及流动培养装置，通过蠕动泵提供稳定的剪切力，同时提供静态培养所需的其它条件， 建立体外人脐动脉血管平滑肌流动培养模型。分别对体外培养的人脐动脉血管平滑肌细胞加载3，4， 5，8，10dyn／cm2的定长流剪切力24h，同时以静态培养的细胞为对照组。相差倒置显微镜观察玻 片上细胞的数量并作细胞计数 ，Ot—actin免疫组化染色． 结果：细胞记数显示，同对照组相比，七刀应力各组的增殖能力都有所下降，5dyn／cm2切应力作用下，细胞增殖缓 慢最为明显．Ot—actin免疫组化染色提示切应力各组的分化程度较对照组高。 结论：初步研究表明，剪切力对人脐动脉血管平滑肌细胞的增殖有一定抑制作用，并且可能促进了细胞的分化。 关键词 剪切力；流动腔 ；动脉血管平滑肌细胞 ；细胞培养 血管是人体内感受血液流动变化最迅速的器 10％胎牛血清DMEM的培养基继续培养。用兔抗人 官，大量研究表明，流体切应力和血管张应力能够调 — actin(鼎国生物技术公司1对HVSMC的仅一肌动蛋 节心血管细胞成分，参与血管的在体的各种生物学变 白进行免疫细胞化学染色，阳性着色95％以上者用 化 l【1。血管平滑肌细胞(VSMC1存在于血管壁中膜， 于试验 。 它是决定血管活性 、血管构型及维持血管张力的重 1．2 定常流流场及平行平板流动腔的设计与制作 要因素2【．s1。血管平滑肌的病理性增殖是组织工程 1．2．1流场的设计与剪切力的计算 血管移植物再狭窄和动脉粥样硬化等血管性疾病亟 本系统中，灌流液粘度 为0．O13dyn．s／cmz，流 待解决得问题之一4【51，而VSMC的分化状态，即 室腔参数：H=0．002cm；W：2．000era；L=6．000cm。 从高分化的收缩型向低分化的合成型转化亦是VSMC 根据Cao6[1等人通过理论研究证明，定常状态下流室 增生的先决条件。本研究通过在不同大小的流体剪 底面所受切应力估算公式为： 切力下对人脐动脉血管平滑肌细胞培养的观察 ，试 下=6 QF／WH 图探讨剪切力同人脐动脉血管平滑肌细胞增殖分化 1．2．2 流室系统 问的关系。 整套FlowChamber系统形成了一个闭合环路，主 要分为包括三个部分：(1)平行平板流动腔；(2)定 1 材料与方法 常流流动系统：培养液由上游储池流经实验流动槽， 1．1 人脐动脉血管平滑肌细胞的获取、原代培养与 回收于下游储池，再经循环泵返回上游储池。(3)温 鉴定 度 、PH值控制装置及辅助设备。如图1： 取 自然分娩或剖宫产健康胎儿的新鲜脐带，性 1．2．3平板流动腔的设计与制作 别、体重不限。以贴块法作