基因捕获技术.pdfVIP

旦 !旦星垫鲞美 丛J… !…52006，vn1 ，No．1 · 综 述 · 基因捕获技术 党素英 王铸钢 摘【要】基因捕获技术是一种产生大规模基因突变的便利手段，对于揭示大量基因序列所对应的 基因功能具有重要应用价值。本文综述了基因捕获技术的基本原理和研究方法、发展现状及远景。 【关键词】 基因捕获；基因捕获载体；表达筛选 “Gene-U-appi~ ”Teehm~ e ． DANGSu-ying，WANGZha-gang． JiaoTongUniversityMedicalSchool，Shanghai200025，P．R．China) Corresponding author：WAN GZha-gang． E-rru,il：zhngangw@vip．163．Corn [Abstract】Gene—trappingisanadvantageoustechniqueforgeneratinggenemutations1TI[L~sivelywhichisim— portanttoidentifythefunctionsoflargequantitiesofgeneseuq ence．Inthisreview，htebasictheory，studystrategies， thedevelopmentnadfuturedirectionsofgene—trapmutagenesisarediscussed． K【eywords]Gene．trapping；Gene．trappingvector；Expressionscleefls 随着人类和其他一些重要动、植物序列数据的 记来克隆突．变基 因…。在胚胎干细胞 (embryonic 快速积累，我们面临着如何鉴定这些序列数据所代 stemcell，ES)内利用同源重组产生特定基因突变的 表的生物学功能的巨大挑战。基因捕获 (gene．trap． 基因打靶技术，即基因敲除和敲进技术 (knock—out0r ping)技术通过报告载体随机整合到基因组、标签插 knock．in)是 目前被用来研究结构信息明确的基因功 入位点、产生插入失活突变并揭示基因表达模式及 能的最重要的手段之一。然而，由于同源重组几率 其功能，已成为建立高通量、大规模基因突变模型的 低、动物繁育耗时费力且产生的功能失活突变(无义 一 种便利手段。随着多种新型载体及捕获策略的出 突变，nullmutations)常常与疾病中发现的分子损伤 现，基因捕获技术已被成功应用于克隆诸如特异组 类型不同，因此，随机突变筛选策略更受研究者青 织发育相关基因、特殊信号传导途径相关基因等多 睐。 种研究中，在功能基因组学研究中具有广阔的应用 基因捕获是一种结合随机突变与对分子信息明 前景。 确的基因突变二者之优势的突变策略，即“随机基因 1 基因功能研究的策略 打靶”，，泛应用于植物、线虫、果蝇及小鼠的研究 中。 基因芯片、组织表达谱分析等多种传统的分子 遗传学方法对于揭示基因功能及复杂的发育事件具 2 基因捕获的基本原理 有重要意义，但阐释某一基因功能的直接策略是基 基因捕获的方法酷似 以报告基因为诱饵来捕获 于对该基因突变后细胞或动物模型的表型分析。因 基因。其基本过程是将一含报告基因的DNA载体 此，x射线、化学诱变、逆转录病毒转染及转基因技 随机插入基因组，从而产生内源基因失活突变，并通 术等多种产生突变的方法相继出现并被应用于基因