《几种茶多酚测定方法的比》.doc

几种茶多酚测定方法的比较 陈惠衡 施 玲 （湖南农业大学 长沙 410128） 摘要 用几种不同的测定方法，对不同种茶叶原料提取物中多酚的测定结果进行了比较，提出了几种测定方法之间的差异和规律。 关键词 茶多酚、酒石酸铁法、Folin—Denis、HPLC法 茶多酚是茶叶中的主要有效成分，茶中多酚含量的多少，可以反映出茶叶品质的优劣。测定茶多酚的方法很多，但我们所常用的方法有酒石酸铁法和菲林试剂法，特别是前者，以其快速简便，容易掌握重现性好而经常使用。但是在实验过程中，笔者发现，茶的品种不同，用不同的方法测定出来的多酚结果也不同，并且从大量的分析数据中找出了其中的规律。 实验材料与方法 1.1 仪器与材料 高效液相色谱（美国Beckman公司） 754紫外－可见分光光度计（上海分析仪器厂） 金农公司生产的速溶绿茶、儿茶素 1.2 实验方法 1.2.1 酒石酸铁法 见GB 8313－87 1.2.2 Folin－Denis法 1.2.2.1 原理：Folin试剂能氧化茶多酚和其它还原性物质并显色。 1.2.2.2 试剂：15%碳酸钠 菲林试剂 1.2.2.3 实验步骤： （1） 绘制标准曲线：吸取标准单宁酸溶液0－10ml一组，分别置于100ml容量瓶中。各加水75ml，Folin试剂5ml，15％碳酸钠溶液10ml，加水定容至刻度，混匀。在30℃条件下，恒温反应30min，于波长760nm处测定吸光度，计算出线性回归方程。 （2） 样品的测定：精确称取40.00－120.00mg（视样品的含量多少而定），加水溶解后定容至100ml。取1ml试液置于100ml容量瓶中，以下步骤同标准曲线绘制。测定吸光度。利用回归方程计算含量。 （3） 实验注意事项：实验过程中温度和时间对其结果有较大影响，必须恒温、定时。 1.2.3 儿茶素的HPLC分析 样品制备： a: 精确称取30mg儿茶素样品于50ml容量瓶中，用水稀释，超声5min，冷却定容； b: 0.45um超滤膜处理后待分析； 1.2.4 仪器：美国Beckman公司生产的HPLC，126泵，168检测器 1.2.5 色谱条件： 色谱柱ODS4.6× 200mm，5um 波长：278cm 流速：1.3ml/min 柱温：30℃ 进样量：10ul 流动相：A水；B N，N－二甲基甲酰胺:甲醇:醋酸＝40:2:1 梯度洗脱： 流动相 时 间（min） 100 : 0 56.41 43.25 80 : 20 55.29 45.08 60 : 40 54.35 47.83 40 : 60 53.16 49.31 20 : 80 52.30 51.78 0 : 100 51.14 53.35 从表一的实验数据不难看出，随着大叶种原料比例的增加，菲林试剂法测定的多酚数据逐渐增加，而酒石酸法测定得的多酚数据则逐渐减少。反之亦然。那么为什么会出现这种规律呢？我们可从以下大小叶种原料生产的绿茶及儿茶素的HPLC图谱中儿茶素组成的差异来说明问题。见图1-4及表二。 2．2 绿茶、儿茶素的HPLC图谱 小叶种绿茶图谱 图1 大叶种绿茶图谱 图2 小叶种儿茶素图谱 图3 大叶种儿茶素图谱 图4 表二：不同产品儿茶素组分的含量 品 种 组分（％） EGC DL－C EC EGCG GCG ECG 小叶绿茶 5.0239 1.1545 3.6002 11.3448 0.5101 5.1203 大叶绿茶 4.0791 4.9437 7.3012 7.3609 0.0608 8.5609 小叶儿茶素 8.7189 1.4567 4.2405 43.4092 1.9472 10.2369 大叶儿茶素 5.1811 7.7993 13.7446 23.1019 0.4284 25.3957 比较图1、图2、 图3、图4及表二的分析数据可以看出，在小叶种绿茶和儿茶素中，EGCG、EGC这些能反映小叶种特征的儿茶素组分的含量高于大叶种，特别是EGCG的含量。而在大叶种中DL－C，EC、ECG这些能反映大叶种特征的儿茶素组分的含量则高于小叶种，而酒石酸铁法和菲林试剂法由于与各儿茶素组分的显色机理不同，从而与不同的儿茶素组分反应的显色能力强弱也各不相同。酒石酸铁法的试剂对EGCG、EGC的显色较敏感，而菲林试剂则对DL－C、EC、ECG的显色较敏感。由此可见要比较一个茶叶品种或茶叶制品的品质如何，不能单评某一种实验取得的结果，