《实验三、 层析法》.pdf

层析理论及技术 层析法/色谱法 （Chromotography）  层析法也称色谱法，是 1906年俄国植物学家 Michael Tswett发现并命 名的。 1944年出现纸层析。 以后层析法不断发展，相继出现气相 层析、高压液相层析、薄层层析、亲和 层析、凝胶层析等。 2 Biochemistry experiment 3 2012-11-20 层析法的基本原理 层析法是利用混合物中各组分物理化学 性质的差异 （如吸附力、分子形状及大 小、分子亲和力、分配系数等），使各 组分在两相 （一相为固定的，称为固定 相；另一相流过固定相，称为流动相） 中的分布程度不同，从而使各组分以不 同的速度移动而达到分离的目的。 3 Biochemistry experiment 3 2012-11-20 层析的基本概念  固定相：固定相是层析的一个基质。它可以是固 体物质 （如吸附剂，凝胶，离子交换剂等），也 可以是液体物质 （如固定在硅胶或纤维素上的溶 液），这些基质能与待分离的化合物进行可逆的 吸附，溶解，交换等作用。 流动相：在层析过程中 ，推动固定相上待分离的 物质朝着一个方向移动的液体、气体等，都称为 流动相。柱层析中一般称为洗脱剂，薄层层析时 称为展层剂。 4 Biochemistry experiment 3 2012-11-20 层析的分类 气相(气- 液; 气- 固)层析 根据两相所处状态 液相(液- 液;液- 固)层析 薄层吸附层析 分配层析 根据层析分离机制 离子交换层析 凝胶层析 亲和层析 柱层析 薄层层析 根据操作形式不同 纸层析 薄膜层析 5 Biochemistry experiment 3 2012-11-20 按层析过程的机理分类： 6 Biochemistry experiment 3 2012-11-20 离子交换层析法原理 利用离子交换剂对各种离子的亲和力不同。 特点 ：利用带有相反电荷的颗粒之间具有 引力作用 固定相：带有大量电荷的离子交换剂 流动相：具有一定pH值和一定离子强度的 电解质溶液 常采用柱层析 洗脱方法 ：增加离子强度、改变pH值。 7 Biochemistry experiment 3 2012-11-20 强酸性 阳离子交换剂 中强酸性 弱酸性 强碱性 阴离子交换剂 中强碱性