钝齿棒杆菌噬菌体的分离鉴定及其生物学特性研究.doc

题 目：钝齿棒杆菌噬菌体的分离鉴定及生物学特性研究 学 院： 生命科学院 专 业： 生物技术 姓 名： *** 指导教师： *** 教授 完成日期： 2011年5月28日 摘 要 钝齿棒杆菌T6-13，广泛应用于氨基酸发酵生产，但由于生产的规模化和连续性，生产菌株极易受到噬菌体污染，造成发酵异常，导致发酵停滞，产酸能力下降，严重时出现倒罐等生产事故。因此，分离得到钝齿棒杆菌噬菌体，研究其特性，对于谷氨酸发酵中的噬菌体防治问题具有重要意义。 本文以钝齿棒杆菌T6-13作为宿主菌，采用双层琼脂平板法从自然环境中分离得到2株钝齿棒杆菌T6-13噬菌体，并将分离出的噬菌体与实验室已有的3株钝齿棒杆菌噬菌体进行了比较。分别从噬菌谱、氯仿敏感性、pH稳定性、紫外线敏感性等方面对其生物学特性进行了研究。实验结果显示，所分离出的噬菌体与实验室已有的噬菌体没有很明显的差异，如：寄主范围的专一性，除了能感染与其亲缘关系较近的突变株钝齿棒杆菌TX之外，对其他实验组的谷氨酸棒杆菌均无感染现象，从而证明了所分离噬菌体的专一性；对氯仿的敏感性测定结果显示，经过氯仿处理过的噬菌体感染力都有些许下降，但都在同一数量级上，从实验整体来看可判断为对氯仿不敏感，或者说噬菌体液中有一部分噬菌体对氯仿敏感，接下来可就这一问题将分离出的噬菌体液进行进一步纯化，进行深入全面的研究；对pH的稳定性研究有利于实际发酵过程中通过pH的调节，进行噬菌体污染的防治，通过探究不同噬菌体的pH适应范围，有针对性的进行pH的调节，从而达到良好的防治效果；最后一项是紫外线的敏感性测定，针对实验室无菌间的噬菌体污染现象，可以提供很好的指导效果，通过设置对照组证明，不同的照射时间对噬菌体的杀死效果不同，因此，在受噬菌体污染的无菌间里，短时间的紫外照射效果很不理想，为了达到良好的无菌效果，应该延长紫外照射时间，并辅以其他措施，如甲醛熏蒸无菌间，酒精擦拭工具及工作人员皮肤等。 这些实验数据为谷氨酸发酵中的噬菌体防治提供了很好的参考意见，同时为筛选广谱抗性发酵菌株提供良好基础，为以后探索谷氨酸棒杆菌抗噬菌体机制，噬菌体与宿主斗争与进化提供研究材料。 关键词：钝齿棒杆菌；噬菌体；分离与鉴定；生物学特性 Abstract Corynebacterium crenatum T6-13, widely used in amino acids fermentation, but for the goingtoscale and continuity of the production fermentation, production strains vulnerable, killing fermentation phage pollution, resulting in fermentation stagnation, abnormal reduced ability to produce acid, serious when appears, pour cans and other production accidents. Therefore, separation get obtuse teeth stick coli phages to study the characteristics, the phages to glutamic acid fermented and to have the important meaning. Taking Corynebacterium crenatum T6-13 as host bacterium, use double deck AGAR plate method have been isolated from the natural environment 2 plants obtuse teeth stick coli T6-13 phages, and will isolate the phage and lab has three strains obtuse teeth stick coli phages are compared. Separately from the bite bacteria spect