TaqMan探针用于转基因食品的荧光定量PCR检测.pdfVIP

维普资讯 第 29卷 第 12期 蔡慧农等 ：TaqMan探针用于转基 因食 品的荧光定量 PCR检测 TaqMan探针用于转基 因食品的荧光定量 PCR检测 蔡慧农 刘 光明 苏文金 王 璋 1(集美大学生物工程学院，厦 门，361021) 2(厦 门出入境检验检疫局 ，厦 门，361012) 3(中国食 品发酵工业研究院，北京，100027) 摘 要 选择 了内源基 因大豆植物凝集素(1ectin)、玉米转化酶 (invertase)和外源基 因抗草甘 膦除草剂 的5一烯醇 式丙酮酰莽草酸一3一磷酸合成酶 (cp4epsps)、抗 欧洲玉米螟 的苏云金芽孢杆 菌杀虫毒蛋 白(crylAb)的TaqMan探针，确 定了探针浓度和镁离子浓度等反应条件 ，分别对 转基 因大豆和转基 因玉米系列标准 品进行 内源基 因和外源基 因的荧光 PCR扩增 ，在 PCR 反 应过程 中分别 以TET和 FAM 两种 荧光通道信号分 别追踪 同一样 品DNA 的 内源基 因和外 源基 因的扩增动力学变化，并袄此绘制 了ACt值与转基 因食 品百分 比含量之 间的标准 曲线， 建立 了转基 因大豆和转基 因玉米 的 TaqMan一荧光定量 PCR检测方法。该 方法具有探 针设计 较简便 、成本较低 的特 点，初步买现 了对转基 因食 品的定量分析及 品种鉴定 。 关键词 转基 因食 品，TaqMan探针，荧光定量 PCR 随着对转基 因农 产 品的不断开发和利 DNA方法 (如 PCR法)以其高灵敏性 、特异 用，转基 因产 品对人类健康和生态环境 的影 性较好和快速简便 的优 点被广泛采用 ，但常 响 已受到 了全世界 的广泛关注 。 目前世界上 规 PCR技术存在的问题是基 因高效扩增可 大 多数 国家规 定转基 因产品的含量超过一定 能产生假 阳性结果和难 以进 行定量检测。荧 阈值 (如 1％，即 100粒产 品中有 1粒为转基 光定 量 PCR(fluorescencequantitativePCR， 因产 品)则需强制加贴标识 。我国于 2001年 FQPCR)技术是近几年发展起来 的新技术， 5月 23日颁布了 《农业转基 因生物安全管理 既保持了 PCR技术灵敏、快速 的特点，又克 条例》，强调 了对转基 因生物及其产 品的管理 服 了以往 PCR技术 中存在 的假 阳性污染和 与控制 。 不 能进 行 准 确 定量 的缺 点L2J。文 中应 用 不论是对转基 因产 品进 行标注 管理 ，或 TaqMan探针建立 了转基 因食 品的 FQPCR 是对转基 因与非转基 因原料 的分别输送 ，转 检测方法 。 基 因原料和食 品的检测技术是必不可少 的， 1 材料与方法 这是对转基 因产品进行安全性评价和实施监 管 的基础。 目前转基因产品的检测方法分为 1．1 材 料 以表达蛋 白为 目标和 以外源 DNA 为 目标 的 1．1．1 试验 材料 2类 …。检测表达蛋 白质 的方法 (如 ELISA 由厦 门 口岸入境 的来 自美 国的进 口大 法)具有灵敏度较高 、特异性强 、可准确 定量 豆、玉米 随机样 ；转基 因大豆标准 品 (GMO 的优点 ，但存在覆盖率低、难 以检测深加工和 含量依次为 0％、0．1％、0．5％、1．0％、2．0％ 外源基 因不表达 的产 品等缺 点 ；检测外源 和 5．0％)、转基因玉米标准 品 (GMO含量依 第一作者 ：硕士，副教授 。 *福建省财政厅科技项 目(No．1401 621601)、厦门市社会发展科技项 目(No．3502Z2001109)、厦 门出入境检验检疫