有机化学基础实验操作.ppt

实验技能（一） 纯化、薄层色谱 无水无氧操作  四、洗脱剂 选择洗脱溶剂时应考虑到被分离各物质的极性和溶解度。 非极性化合物用非极性溶剂，而极性溶剂对于洗脱极性化合物是有效的。被分离各物质应在洗脱溶剂中有非常好的溶解性，否则会严重影响分离效果。若欲分离的混合物组成复杂，单一溶剂往往不能达到有效的分离，通常可以选用混合溶剂作洗脱剂。 下列为柱色谱常用的洗脱剂及其洗脱能力（按次序递增）： 己烷、石油醚＜环己烷＜四氯化碳＜二硫化碳＜甲苯＜苯＜二氯甲烷＜三氯甲烷＜乙醚＜乙酸乙酯＜丙酮＜丙醇＜乙醇＜甲醇＜水＜吡啶＜乙酸。 实验室一般常用石油醚(正己烷)/ 乙酸乙酯系(分离极性较小的化合物)和二氯甲烷(氯仿)/甲醇系(分离极性较大的化合物)。对于分离极性较大的化合物，如氨类、酰胺类化合物，为防止其产生拖尾现象，可在洗脱剂中加入少量的三乙氨、氨水或醋酸。 *具体选择应参照TLC的结果选择合适的洗脱剂。  五、装柱 *重要事项：装柱一定要在抽风良好的通风橱中进行，并带好口罩，以防吸入过多的硅胶或氧化铝粉尘而对身体产生致命伤害。 装柱是柱层析中最为关键的操作，装柱的好坏将直接影响分离效率。 首先必须将层析柱垂直固定在铁架上，填充时要求将柱填装均匀、严实，不应夹有空气泡，并使柱顶表面保持水平。 柱层析的装柱一般有干法和湿法二种。下面以吸附剂硅胶为例分别讲述这两种装法。  1、干法装柱：将硅胶慢慢地从柱顶小心加入，同时用橡皮棒轻轻敲击玻璃柱，以使硅胶颗粒尽可能填充均匀严实（可以用水泵抽）。任何隙缝、断层、气泡都将影响分离效果。装好硅胶后，最好在其上铺上一层石英沙，以防止在加入洗脱剂和待分离样品时冲坏硅胶层的顶部。然后从柱顶小心加入非（小）极性溶剂或洗脱剂并使其充分润湿硅胶层，并以一定的流速流入接受瓶。在此过程中，也要防止隙缝、断层、气泡的产生以影响分离效果。通常可以先用非（小）极性溶剂或洗脱剂预洗（可以加压）柱子一定体积消除上述现象后再上样分离，这样也可以把硅胶、石英沙、砂芯（玻璃棉）本身可能带有的一些杂质洗去。 干法装柱还可以先在层析柱中装入非（小）极性溶剂或洗脱剂，在慢慢加入硅胶。 2、湿法装柱：先把硅胶和非（小）极性溶剂或洗脱剂（一般按体积比1：2）充分混合，形成均一的可流动浆状物，小心倾入层析柱，然后一些石英沙，用一定体积的非（小）极性溶剂或洗脱剂预洗以去除可能产生的气泡。其他注意事项和干法装柱一样。  注意：在加待分离样品前，不能让柱子流干。加样时，当非（小）极性溶剂或洗脱剂的液面与硅胶层顶部，即石英沙层相平时（切记不可超过该水平线！否则会产生新的裂缝和气泡！）即可加入样品。 柱色谱装置 正常展开的层析和应避免的的两种情况的对比 左为水平表面，中为非水平表面右为夹有空气泡的情形   六、上样 上样一般按待分离物的性质而分为液体上样和固体上样两种。 1．液体上样：把要分离的试样配制成适当浓度的溶液。将硅胶上多余的溶剂放出，直到柱内液体表面到达石英砂表面时，停止放出溶剂。沿管壁加入试样溶液，注意不要使溶液把石英砂、硅胶层冲松浮起，试祥溶液加完后，开启下端旋塞，使液体渐渐放出，至溶剂液面和石英砂层表面相齐(勿使石英砂表面干燥)即可用溶剂洗脱。 2、固体上样：当待分离样品为固体时不能直接上样，一般采用拌硅胶上样法。将固体样品溶于丙酮、氯仿等低沸点溶剂中（注意：样品在选择的溶剂中应有相当好的溶解性，尽量避免用甲醇、乙醇等沸点较高的溶剂，以防最后不能除尽而影响分离效果）加入一定量的粗硅胶（一般用100-200目的硅胶，用量大致和样品的重量量比为3-5：1）充分摇匀，然后旋干溶剂，干燥得到的细粉状固体后小心倒入准备好的层析柱中，并使其表面呈水平，再加入一层石英砂以防加入洗脱剂破坏其表面。小心加入洗脱剂后便可开始走样了。当然，如果该固体在洗脱剂中有较好的溶解度，也可使其直接溶于尽量少的洗脱剂中按液体上样法处理。此法只适用于较少的样品量。  七、洗脱和分离 在洗脱和分离的过程中，应当注意以下几点： 1、继续不断地加入洗脱剂，应保持一定高度的液面，在整个操作中勿使硅胶层表面的溶液流干，一旦流干，再加溶剂，易使硅胶柱产生气泡和裂缝，影响分离效果。 2、收集洗脱液，如试样各组分有颜色，在硅胶柱上可直接观察。洗脱后分别收集各个组分。在多数情况下，化合物没有颜色，收集洗脱液时，多采用等份收集，每份洗脱剂的体积随所用硅胶的量及试样的分离情况而定。一般若用50 g硅胶，每份洗脱液的体积常为50 mL。如洗脱液极性较大或试样的各组分结构相近似时，每份收集量要小。 3、控制洗脱液的流出速度，