急性心肌梗死患者外周血Exosomes心肌酶和病变严重程度相关性及研究.pdf

急性心肌梗死患者外周血来源Exosomes 与心肌酶和病变严重程度的相关性研究 摘 要 目的：本研究通过对急性心肌梗死患者外周血来源的Exosomes 的定量、定性分 析，探讨急性心肌梗死患者 Exosomes 与心肌酶学浓度、冠脉病变程度的相关性。进 一步了解外周血来源的 Exosomes 水平在心肌梗死发生发展中的作用及其对急性心肌 梗死的预测以及应用价值。 方法：1、临床病人的选择：选择2010-9～2011-5 因胸痛可疑冠状动脉疾病CAD 在我院心内科住院的 93 例患者进行选择性冠状动脉造影。并将 93 例患者分为以下四 组：N 组（24 例，正常对照组），AMI 组（23 例，急性心肌梗死组），SA 组（24 例， 稳定性心绞痛组），UA 组（22 例，不稳定心绞痛组）。2 、外周血Exosomes 的提取： 于病人行冠状动脉造影术过程中取动脉血 40ml ，Ficoll 离心得血浆，等量 PBS 稀释， 经 2000g*30min 离心，将上清转入到超离管中 12,000 × g, 离心 45min ，4 C，之后转◦ 移到另外一只超离管中 11，000g*2h，4 C，1ml PBS 重悬，补足 PBS,经 0.22 μm 滤◦ 器过滤，11，000g*70min 离心后得到 Exosomes ，50 μl-200 μl PBS 重悬，-80 度冰 箱保存以备下一步实验需要；3、BCA 定量：取 Exosomes 样本 2ul ，稀释 5 倍，按照 样本与底物 1:20 的比例，在nanodrop 上进行 BCA protein 定量；4 、流式分析：5ug Exosomes 与 4 μm 直径的醛／硫酸乳胶珠在室温结合 15 min，加PBS 补充至 1ml， 室温震荡 2 h ，加入 1mol ／L 甘氨酸 30 min 阻断反应，4000rpm 离心 3min，弃上清， PBS/0.5% BSA 洗涤 3 次,500 ul PBS/0.5%BSA 重悬，取出 10ul 结合 Exosomes 的磁珠 分别加入 PE-CD11c 单克隆抗体、PE-CD81 单克隆抗体、APC/cy7-MHC Ⅱ单克隆抗 体、pacific bule-CD86 单克隆抗体、PE-CD106 单克隆抗体、PE-CD54 单克隆抗体、 [1] FITC-CD3 单克隆抗体及相应的同型对照，避光孵育 1 h，PBS 洗涤 3 次，上机检测 。 5 、记录总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋 白胆固醇(HDL-C)、糖化血红蛋白（HbA1c) 、CK、CK-MB、CK-MM、空腹血糖(FPG)， 同时测量收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、年龄、性别等相关指标，询问吸烟史、高血压 病史及糖尿病史。以冠脉病变支数和 Gensini 积分评价冠脉病变严重程度。 6 、采 用 SPSS18.0 统计软件进行分析。计量资料以均数±标准差( x ±s)表示。多组之间 比较采用方差分析，两组间比较采用 t 检验；P0.05 为差异具有统计学意义。两样 本均数比较采用 t 检验，多样本均数比较采用方差分析，各率及例数的比较用卡方 2 检验( χ 检验) ；Exosomes 与 CK 、Gensini 积分等的单因素相关分析应用 Spearman 秩相关。冠心病危险因素分析采用二分类 Logistic 回归分析，回归模型以 Gensini 积分为因变量，年龄、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、白细胞 - 1 - 急性心肌梗死患者外周血来源Exosomes 与心肌酶和病变严重程度的相关性研究 计数、CD11C、CD86、MHC-DR 、CK、CK-MM、CK-MB 等为自变量。以 P0.05 为 差异有统计学意义。 结果：1、AMI 与 UA 患者 Exosomes 的定量水平显著高于正常对照组，AMI 组 Exosomes 的表达量显著高于 SA 组，患者 Exosomes 的表型分析显示，AMI 患者表达 的CD11C