抗人CD80单链抗体(ScFv)的双价抗体(diabody)研制的生物学功能初步及研究.pdf

中文摘要 抗人CD80单链抗体(ScFv)及双价抗体(diabody)的研制及生物学功能初步研究 中文摘要 cell，APC) I型跨膜糖蛋白，主要表达在专职性抗原提呈细胞(antigen．presenting 树突状细胞、单核．巨噬细胞及B淋巴细胞。CD80分子的配体为表达在T淋巴细 促进T细胞的增殖与分化；而与CTLA-4结合介导抑制信号，从而下调或终止T 细胞效应。若缺乏此共刺激信号，抗原特异性的第一信号非但不能有效激活特异 性T细胞，反而导致T细胞无能，或者耐受。研究表明，CD80介导的信号通路不 仅能调节T细胞活化过程，而且还参与许多疾病的发生发展及预后状况。 variable 单链抗体(single-chain variable 完整的抗原结合位点，由重链可变区(the chain，VH)和轻链可变 heavy variable 区(the light 短至3．10个氨基酸时，可促进分子间VH和VL的配对而形成。 研究 1．目的：构建及表达抗人CDS0单链抗体(ScFv)，鉴定其抗原抗体结合活性， 并初步研究其生物学功能。 2．方法：采用RT-PCR法从分泌鼠抗人CD80 McAb的杂交瘤细胞株(4E5)中 单链抗体基因，并克隆至plRES2．EGFP表达载体，脂质体法转染中华仓鼠卵巢细 中文摘要 刺激信号的阻断作用。 肽编码基因。实验获得稳定分泌细胞株(命名为SA．II)。上清中抗体得率为 4E5与抗原结合的竞争抑制率达98．67％，并能抑制Raji细胞的体外增殖，而且能 阻断CD80介导的共刺激信号转导，抑制PBMC的增殖，增殖率下降43．48％。 4．结论：成功构建的表达抗人CD80一ScFv的细胞株，其分泌的抗体具有良好 的生物学活性。该抗体的研制在CD80及相关分子的基础或／及临床研究中具有重 要的应用价值。 步研究 能。 高表达细胞株，扩大培养并收集上清，经镍柱纯化，并经变性及非变性SDS—PAGE 电泳对抗体分子的双体性进行鉴定。以鼠源性亲本抗体4E5为对照，测定抗人 CD80分子的结合活性及与鼠源性亲本抗体4E5的竞争抑制效应；MTT法分析该 的共刺激信号阻断作用的影响。 肽和Gly4Ser连接肽编码基因。获得了稳定分泌双价抗体的细胞株(命名为SA—III)， 培养上清中纯化抗体的得率为15mg／L，PAGE结果显示其为一个二聚体，Mr约为 53kDa(抗人CD80．ScFv Ⅱ 抗人CD舳单链抗体(ScFv)及双价抗体(diabody)的研制及生物学功能初步研究中文摘要 该抗体对鼠源亲本抗体4E5与抗原结合的抑制率为97．11％，对贼i细胞体外增殖 的抑制率达31．27％。同时也能阻断CD80介导的共刺激信号。与单链抗体相比， 亲和活性明显提高。 的生物学活性，亲和活性较单链抗体也明显提高，为进一步对CDS0分子的研究奠 ’ 定了基础。 关键词：CD80：单链抗体；双价抗体；真核表达 作者：陈昌友 导师：邱玉华教授 111 ofanti--humanCD80—-ScFvand Preparation