量子点标记技术检测肺炎支原体抗原方法建立.pdf

目 录 一、摘要 中文论著摘要………………………………………………………………………1 英文论著摘要………………………………………………………………………3 二、英文缩略语………………………………………………………………………．．5 三、论文 前言…………………………………………………………………………………………………………．．66日Ⅱ舌…………………………………………………………………………………………………………．． 材料与方法…………………………………………………………………………7 实验结果…………………………………………………………………………．11 讨论…………………………………………………………………………………………………………15 结论…………………………………………………………………………………………………………16 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………17 五、参考文献…………………………………………………………………………18 六、附录 综述…………………………………………………………………………………………………………21 1 在学期间科研成绩…………………………………………………………………3 致谢…………………………………………………………………………………………………………32 个人简介………………………：…………………………………………………．33 ·中文论著摘要· 量子点标记技术检测肺炎支原体抗原方法的建立 刖 吾 近年来，量子点凭借其自身独特的光谱特征和光化学稳定性越来越受到人们 的重视。量子点(quantumdots，QDs)是一种半导体纳米晶体，与传统荧光染料 相比，具有激发光谱宽、发射光谱窄、发光效率高，发光颜色可调，并且具有较 高的荧光强度和光稳定性，能够承受多次的激发和光发射等一系列优点，在实验 室诊断中有着广泛的应用前景。 肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae，Mp)不仅引起急性呼吸道疾病，还引起 其它多系统、多器官的肺外并发症。由于Mp无细胞壁，故其引起感染的治疗与 其它细菌和病毒感染在治疗方法上有所不同，因此，Mp感染的病原学诊断对于疾 病的及时正确治疗有重要意义。对Mp的实验室诊断，主要是通过支原体分离培 养、血清学检测和分子生物学等方法，而这些方法存在着各自不同的优缺点，因 此，到目前为止，国内外对Mp的实验室诊断没有统一的标准。本研究基于QDs 标记技术，针对Mp抗原建立了一种快速、简易可靠，而且特异的诊断方法。 方 法 l、 肺炎支原体Pl重组蛋白多克隆抗体的制备与纯化 经P1重组蛋白免疫家兔获得抗血清后，采用硫酸铵沉淀法和离子交换层析法 对其进行纯化，通过聚丙烯凝胶电泳检测其分子量与纯度。 2、 量子点与肺炎支原体P1重组蛋白多克隆抗体的偶联 采用碳二亚胺盐连接法，使量子点QD605的羧基与抗体上的氨基反应，形成 肽键。然后用离心法纯化偶联产物，纯化后采用膜直接免疫荧光法验证量子点 QD605与抗体的偶联，并采用荧光分光光度法对其荧光效率进行检测。 3、偶联产物检测肺炎支原体 采用直接免疫荧光法用偶联产物与待检测抗原反应，洗去偶联产物后进行荧 光检测。同时对其敏感性和特异性进行检测。 结 果 l、 肺炎支原体P1重组蛋白多克隆抗体的纯化鉴定结果 P1重组蛋白免疫家兔获得的抗血清经硫酸铵沉淀法和离子交换层析法纯化 后，在聚丙烯凝胶电泳上可见在58KD处有明显的一条带。 2、 量子点与肺炎支原体P1重组蛋白多克隆抗体的偶联结果 膜直接免疫荧光法表明只有偶联产物与Mp抗原反应在紫外灯下发荧光，单 独的量子点QD605、未标记的抗体及其它对照与Mp抗原反应在紫外灯下均不发荧 光，验证了量子点QD605与抗体的偶联。然后采用荧光分光光度法对量子点QD605 及偶联产物的荧光效率进行检测，结果显示两者并没有明显的改变，说明偶联产 物的荧光强