能量限制白藜芦醇对U937泡沫细胞CD36、SIRT1、SIRT3表达影响比较及研究.pdf

能量限制与白藜芦醇对U937 泡沫细胞CD36、 SIRT1、SIRT3 表达影响的比较研究 Comparison of the effects of calorie restriction and resveratrol on the expression of CD36,SIRT1 and SIRT3 in U937 foam cells 研 究 生：李 乔 专 业：内科学 导 师：王 伟 主任医师 中国 汕头 20 11．5 汕头大学医学院硕士研究生论文 II 汕头大学医学院硕士研究生论文 摘 要 背 景 动脉粥样硬化性疾病已经成为威胁人类健康的主要疾病，单核巨噬细胞源性的泡沫细 胞是粥样斑块早期形成阶段的典型病变，贯穿于动脉粥样硬化疾病的发生发展。单核细胞 源性泡沫细胞上的清道夫受体 CD36 能识别、内吞氧化型低密度脂蛋白，而氧化型低密度 脂蛋白又通过诱导 CD36 的高表达来刺激其对本身的摄取，形成正反馈，造成胆固醇在细 胞内不断积累,最终导致泡沫细胞的形成。泡沫细胞形成后，CD36 高表达能诱导单核巨噬 细胞向粥样斑块粘附聚集，并参与血管壁的炎症反应，引起动脉粥样硬化的进一步发展。 能量限制和白藜芦醇在许多实验中已证实有一定的抗动脉粥样硬化作用，而且研究证实它 们均能调节沉默信息调节因子 2 （Sir2）的表达，我们希望以建立单核巨噬细胞源性泡沫 细胞模型为研究的切入点,初步探讨能量限制和白藜芦醇在调节泡沫细胞 CD36 方面的作用 及有关机制。 目 的 初步探讨能量限制（calorie restriction,CR）对于单核巨噬细胞源性泡沫细胞清道 夫受体CD36 的抑制效果及调控通路以及白藜芦醇 resveratrol,Res 是否能完全模拟出CR 效果及其原因所在，进行对比实验观察 CR 与 Res 对于人 U937 泡沫细胞 CD36 和长寿基因 SIRT1 与 SIRT3 mRNA 表达的影响。 方 法 6 1．当人 U937 细胞长至 1.0×10 个/ml 后，用终浓度为 100ng/ml 的佛波酯（phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA）和终浓度为 80 μg/ml 的人氧化型低密度脂蛋白 ox-LDL 刺激48h，油红O 染色后光镜下可见细胞胞浆内存在大量的脂滴,符合泡沫细胞的形态特征， U937 泡沫细胞模型建立。 6 2．分别用含不同浓度白藜芦醇的培养基培养细胞密度为 1.0×10 个/ml 的U937 泡沫细胞 24 小时，并利用四氮唑蓝检测法（MTT）和流式细胞计数检测法（FCM）确定一个对于细胞 损伤较小且效果最好的药物作用浓度。 3．U937 泡沫细胞模型建立后，随机分为四组：分别用高糖 DMEM （泡沫细胞模型组）、低 I 汕头大学医学院硕士研究生论文 糖 DMEM （CR 组）、高糖DMEM 加白藜芦醇 （Res 药物组）、高糖DMEM 加白藜芦醇与尼克酰胺 （Res 药物对照组）四种培养基继续培养泡沫细胞48 小时。 4．分别提取各组细胞内 mRNA，进行逆转录PCR 检测，观察各组间泡沫细胞清道夫受体 CD36 和长寿基因 SIRT1、SIRT3 的mRNA 表达水平情况。 结 果 1．MTT和FCM的检测结果显示，20 μM 白藜芦醇是一个比较合适的药物作用浓度。 2．与泡沫细胞模型组对比，CR组CD36 mRNA表达显著降低 P 0.01 ，Res药物组CD36 mRNA 表达降低 P 0.05 ，Res药物对照组CD36 mRNA表达没有显著变化 P ﹥0.05 ；与Res药物 组对比，CR组CD36 mRNA表达降低 P 0.05 。 3．与泡沫细胞模型组对比，CR组SIRT1 mRNA表达增加 P 0.05 ， Res药物组SIRT1 mRNA 表达显著增加 P 0.01 ，Res药物对照组SIRT1 mRNA表达没有显著变化 P ﹥0.05 ；与CR组 对比，Res药物组SIRT1 mRNA表达增加 P 0.05 。 4．与泡沫细胞模型组对比，CR组SIRT3 mRNA表达增加 P 0.05 ，Res药物组SIRT3 mRNA表 达没有显著变化 P ﹥0.05 ，Res药物对照组SIRT3 mRNA表达没有显著变化 P ﹥0.05 ； 与 CR组对比，Res药物组SIRT3 mRNA表达降低 P 0.05 。 结 论 1．CR能使U937泡沫细胞长寿基因SIRT1及SIRT3的mRNA表达水平上调，清道夫受体CD36的 mRNA表达水平下调，对于泡沫细胞的发展有抑制作用。 2． 白藜芦醇能使长寿基因SIRT1 mRNA