拟南芥MicroRNA通路新因子鉴定和作用机制及研究.pdf

』㈣炒 拟南芥MicroRNA通路新因子的鉴定 和作用机制研究 摘要 RNA．sRNA ， 在很多生物学过程中起着重要的调节作用。miRNA的产生过程包括由PolII转录出 其前体 primary 加工形成成熟的miRNA两个过程。miRNA与ARGONAUTEl fAG01 结合形成 RNA沉默复合物 RNA—Induced SilencingComplex，RISC ，主要通过切割靶基因 mRNA或抑制翻译调节基因表达。 为了加深我们对miRNA通路机制的理解，我们利用一个高效表达可使拟南芥 表皮毛成簇的人工miRNA的转基因系，建立了针对miRNA通路的遗传筛选体系。 miRNA 通过诱变筛选，我们得到了一些miRNA活性增强 enhanced activity，ema miRNA activity，cma 的突变体。在本研究中，我们鉴定和研 或减弱 compromised CIRCADIAN 究了cma33突变体。CMA33编码一个核蛋白XCT XAP5 miRNA以及另外两类sRNAs，依赖于DCL3的heterochromatic 依赖于DCL4的trans—acting 突变体中PolII在这三个DCL基因上的结合减少，这意味着XCT通过调控DCLl、 DC那和DCL4的转录调节sRNA的生成。 13家族蛋白，可以负调节miRNA进 我们之前报道的EMAl编码一个impoain 入AG01的过程。在本研究中，我们进一步以emal突变体为材料，进行了emal 的抑制子筛选 suppressor 和soe2突变体中，Pol 万方数据 很可能作为偶联的桥梁，使pri-miRNA的加工更加高效、有序。 万方数据 Identification andCharacterizationofNovel inthe MicroRNA ComponentsArabidopsis Pathway ABSTRACT aclasssmall of various MicroRNAs miRNAs are RNAs sRNAs thatregulate in ofmiRNAsinvolvesthe biologicalprocesseseukaryotes．Thebiogenesis transcription of miRNAsandtheir Dicer-like mature primary subsequentprocessingby 1 DCL1 into miRNAs．MaturemiRNAsareloaded form into Argonaute1 AGO1 to RISC RNA induced mRNA and／or silencingcomplex toregulatetargetgenes through cleavage translational repression． Froma screenthatisbasedonanartificialmiRNA trichome genetic causing when haveobtaineddozensofmutantswithenhanced clusteringoverexpressed，we miRNA miRNA this activity ema or compromisedactivity cma ．Instudy,weanalyzed cma33．CMA33encodesanuclear localized CIRCADIAN proteinXCT XAP5 hasbeen showntobeinvolvedincircadianclockand TIMEKEEPER ．XCT previously cma33／xct ledto ethyleneresponse．ThemutationreducedaccumulationofmiRNAsas wellas heterochromatic DCL3一dependent siRNAs he-siRNAs andDCL4一dependent foundthatthe of DCLl， trans-actingsiRNAs ta—siRNAs ．Surprisingly,weexpression DCL3and notother involvedinsRNA decreasedin DCL4，but genes pathways，was cma33／xctmutant．Consistentwith ofPolIIat and this，theoccupancy DCLl，DCL3 reducedthelossof thatCMA33／XCT DCL4，was upon CMA33／XCT,sugges