牛病毒性腹泻%2f粘膜病病毒E0、E2基因免疫原性比较.pdf

本文是自治区高技术发展计划项目 “牛病毒性腹泻／粘膜病检测试剂盒研制 腹泻／粘膜病流行病学调查与灭活疫苗生产种毒筛选(项目 编号：201141147)的部分研究成果 课题主持人：冉多良 (新疆农业大学) 万方数据 牛病毒性腹泻／粘膜病病毒EO、E2基因免疫原性的比较 摘要 牛病毒性腹泻病毒(BVDV)为黄病毒科，瘟病毒属成员，是一种在世界范围内对造成家畜健 康严重危害的病原。该病能引起患畜高热、鼻内粘膜及口腔出血或产生大量粘液、母牛奶量减少甚 至停止产奶、怀孕母牛流产或产死胎、畸形胎等症状。牛病毒性腹泻病毒(BVDV)与猪瘟病毒和 羊边界病毒在血清学上有交叉反应。目前为止，还没有有效的预防和控制BVDV的措施，因此急需 研制出新型理想的疫苗防制该病。本研究主要包括以下两个部分内容： 上，成功构建了含有牛病毒性腹泻病毒E2基因的真核表达载体pVAXl．E2．通过脂质体介导重组质粒 转染293T细胞，经Westernblot证实E2基因可在293T细胞中表达。随后将重组核酸疫苗肌肉注射 免疫小鼠，检测一免、二免、三免的小鼠血清中和抗体效价，以及三免后的小鼠淋巴细胞增殖情况。 性血清抗体的产生，而E2组效果不明显。MTT检测显示两组均大大促进了特异性淋巴细胞的增殖， 且E2组效果好于E0组。 原核表达宿主菌，用IPTG诱导表达，并确定表达的最佳诱导时间和温度，通过聚丙烯酞胺凝胶电 泳和蛋白印迹分析确定，表达的蛋白能与BVDV阳性血清发生特异性反应。用纯化后的蛋白免疫小 鼠，经ELISA检测和MTT实验，两蛋白组与对照组相比，均产生了显著地的差异，且E2组效果好 于E0组。 关键词；牛病毒性腹泻病毒；E0基因；E2基因；真核表达；原核表达 万方数据 andE2 Thedifferenceof betweenEO gene immunogenicity 。Bovine,iralovinev diarrhea／mucosaldisease11isea Abstract Bovineviraldiarrheavirusisonememberofthe aserious Flaviviridae，Pestivirus．It’Spathogen diseasecancause fever，oral tOthelivestock。healtharoundtheworld．This patienthigh seriouslyendanger ofmilk evenoff andnasalmucosal or oversecretion，reduction bleedingm．ucus productionproduction， anomaliesandother has COW orstillbirth，fetal ab．ortion symptoms．BVDVserological pregnant thereisnocommercialvaccinestO the cross-reactionswithCSFVandBDV．