去甲肾上腺素诱导延迟相大鼠心肌缺血预适应机制及研究.pdf

中文摘要 ，JJ抽 ~J~ 月吐 舀 冠心病是严重威胁人类生命健康的常见病和多发病，随着人口的老龄 化，该病严重威胁中老年人健康状态与生存质量。冠状动脉血运中断后，该 血管支配区 危险区 内的心肌细胞缺血、缺氧，并逐渐发生细胞坏死。危 险区内心肌坏死的发生速度和严重程度受许多因素的影响;研究这些影响 因素，以期能最大限度地减慢心肌坏死的发生，减轻心脏功能受损程度，对 指导临床抗心肌缺血治疗方案的选择具有重大的意义。 目前的研究进展表明，机体自身特有的抗损害保护机制在挽救濒危心 肌，减轻心功能紊乱中发挥了重要的作用。预适应，即预先给予一定量的刺 激，以激发机体自身的抗损害保护能力，可显著减少心肌坏死程度、心率失 常的发生率、减轻心脏收缩与舒张功能紊乱。有关预适应，尤其是药物诱导 的延迟相预适应保护，因其强大的心肌保护功能、良好的临床应用前景引起 了全球心血管病学研究人员的重视，是目前预适应研究的焦点。阐明延迟 相预适应保护的发生机制，将掀开临床抗心肌缺血治疗及心脏外科手术新 的篇章。本实验利用目前预适应研究中应用最为广泛的诱发预适应药去甲 肾上腺素 NE ，诱导大鼠产生延迟相预适应保护，定量预适应产生的心脏 保护强度，研究心肌细胞膜上主要离子泵功能在预适应心肌的变化规律，并 通过研究机体抗氧化剂酶 SOD 系统在预适应大鼠的变化，探讨预适应心 肌保护的机制。 实验材料 一、实验动物:健康SD系大鼠，由中国医科大学实验动物中心提供。 二、实验药品:TTC,EvansBlue，心肌酶谱系列测定试剂盒 第一部 分 ;ATP酶测试盒 第二部分 ;SOD测试盒及SOD一1放免试剂盒，KCN 第三部分 三、实验仪器:心电图机;小动物呼吸机;自制简易血压计;电子天平; Olympus实体显微镜,OlympusDP10数码相机、计算机图象分析软件 Meta- MorphImagingSystem ;BIOTRONBTR-811半自动生化仪;电动匀浆器;恒 温孵育箱;低温高速离心机;电热恒温水浴箱;721分光光度计;KONTRON GAMMACOUNTINGSYSTEM;超声波发生仪 实验方法 制作在体大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型:，手术前一晚大鼠禁食，不禁 水。3%戊巴比妥纳腹腔注射麻醉，气管插管接呼吸机，右颈总动脉插管，监 测动脉血压。胸骨左缘约0.5cm,剪断3,4肋骨，暴露胸腔。以左冠状静脉 为标志，用3/8圆3x10不锈钢圆针，3-0丝线在距冠状动脉开口2mm左 右缝一针。进针深度应穿过心肌lmm左右，进出针间宽度应在左冠状静脉 周围1.5-2mm左右。采用笔者自行改良的推管法行左冠状动脉缺血/再 灌注。左冠状动脉缺血30分钟，再灌注120分钟。制成大鼠心肌缺血/再 灌注损伤模型。 第一部分:将大鼠分为四组: 1 NE组 n 10 开胸手术前24小时腹 腔注射去甲肾上腺素3.1umol/kg诱发预适应; 2 UR组 n 10 手术前 24小时腹腔注射生理盐水0.4m]/只。两组行左冠状动脉缺血30分钟，再 灌注120分钟。 3 穿线组 n 6 术前24小时取3只腹腔注射去甲肾上 腺素，另3只腹腔注射生理盐水，左冠状动脉下只穿线不结扎。 4 对照组 n 3 麻醉后直接开腹取血。NE组与I/R组再灌注结束后再次结扎左冠 状动脉，静脉注射2%EvansBlue1耐，待鼠口唇蓝染后，迅速取下心脏，剔 除心房右室，平行房室沟将左室切成5片，行TTC染色，染色后左室断面数 码相机拍照，利用计算机图象分析系统分别计算左室总面积，危险区总面 积，梗死区总面积，并比较危险区/左室面积，梗死区/危险区面积;测定四组 大鼠血清心肌酶谱，即CK,CK一MB,LDH,AST, 第二部分:大鼠分三组:I/R n 10 ,NE n 10 、穿线组 n 3 。分 组及手术方法同第一部分。再灌注结束后，迅速取心脏放人冰生理盐水中， 剪取左室前壁缺血区组织，立即一80℃冻存。配制提取心肌细胞膜所需缓 冲液I一W，按W/V比1;9做心肌组织匀浆，用低温高速离心方法制备心肌 细胞膜。按试剂盒步骤用定磷法通过光电比色测心肌细胞膜上Na,K’一 ATPase,Cat,M扩十一ATPase活性。 第三部分:大鼠分三组:I/R n 10 ,NE n 10 、正常组 n 3 。分 组及手术方法同第一部分。再灌注结束后，迅速取心脏放人冰生理盐水中， 洗净残存血液，立即一80℃冻存。采用低温高速离心方法分离心肌细胞胞 浆及线粒体。用黄膘吟氧化酶法通过光电比色测定心肌细胞胞浆Cu2`, Z矿 ‘一SOD与心肌线粒体Mn一SOD活力，用放免测定法测定血清及心肌 细胞胞浆Cue*,Zn2’一SOD含