乳腺癌组织中PIK3CA、KRAS的BRAF基因突变热点区域序列分析.pdf

万方数据 乳腺癌组织PIK3CA 、KRAS 及BRAF 基因突变热点区域的序列分析 摘要 乳腺癌组织PIK3CA、KRAS 及BRAF 基因 突变热点区域的序列分析 摘要: 乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤之一，严重影响女性的身心健康甚至 危及生命，随着细胞生物学及分子生物理论和技术的发展，现已认识到基因突 变在乳腺癌的发生、发展过程中起着非常重要的作用。目前已证实多种基因在 乳腺癌的早期诊断及预后判断等方面有着重要的意义。 PIK3CA 是PI3Ks 家族的关键成员，是染色体3q26.3 上一段长度为34 kb 的基因，由20 个外显子组成，编码1068 个氨基酸组成的p110α 催化亚单位。 PIK3CA 基因是一种癌基因，在多种人类肿瘤中存在突变。近几年来已有数篇 报道指出PIK3CA 基因在结肠癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、肝癌等多种肿瘤中 发生了高频体细胞突变。研究发现PIK3CA 基因突变，是除了HER2 基因扩增、 p53 基因突变之外乳腺癌最常见的基因突变之一。 KRAS 基因是RAS 家族的成员之一，位于12 号染色体短臂上，长度为35 kb ，是表皮生长因子受体的下游分子，KRAS 基因含有4 个编码外显子和1 个 5’端非编码外显子，共同编码含有 189 个氨基酸组成的RAS 蛋白，在RAS 基 因家族中，KRAS 对人类恶性肿瘤的影响最大，约30%的人类肿瘤中检测到了 RAS 基因的突变。 BRAF 基因是在人类尤文氏肉瘤中发现并克隆确认的能传染NIH3T3 细胞 并且具有活性的DNA 序列，位于7q34 染色体，长度约 190 kb，有功能的编 码区由 2150 对碱基组成，该基因是Ras-Raf-MEK-ERK 信号转到通路非常重 要的转导因子，人类恶性肿瘤中约有 7%-8%发生了BRAF 基因突变，其突变 位点主要位于第 11 和第 15 外显子上，最常见的是V600E 突变。近年来研究 表明，BRAF 基因的突变状态能够预测且对抗EGFR 治疗产生影响，从而影响 到乳腺癌患者的预后情况，BRAF 基因可作为乳腺癌研究中一个非常重要的靶 点。 万方数据 乳腺癌组织PIK3CA 、KRAS 及BRAF 基因突变热点区域的序列分析 摘要 迄今为止，对于乳腺癌基因突变的研究大多是针对西方高加索人群，而对 中国乳腺癌患者的基因突变的研究较少。然而，肿瘤的发生是一个多因素、多 阶段、多基因变异累计的复杂过程，基因的突变频率、突变位点在不同种族， 不同人群中也存在着一定的差异，因此，本研究旨在对中国女性乳腺癌组织中 PIK3CA 、KRAS 、BRAF 基因突变热点区域的检测，分析这三种基因突变热点 区域的突变情况。 本研究针对从淮北市矿工总医院收集来的女性乳腺癌标本进行基因组 DNA 的提取，分别对PIK3CA 基因、KRAS 基因、BRAF 基因突变热点区域进 行PCR 扩增，并对扩增产物进行测序分析，得到结果：本研究所搜集的26 例 乳腺癌患标本中发现：1、8 例PIK3CA 基因的突变，突变频率为 30% 。第9 外显子的突变 1 例（G1633A ）；第20 外显子的突变7 例（A3140G ），其中1 例在A3140G 突变的同时还发现了一个新的突变位点A3134C 。2 、6 例KRAS 基因突变，突变频率为 23% ，突变位点均位于KRAS 基因热点突变区域第 2 外显子C100A 。3、5 例BRAF 基因突变，突变频率为 19%，突变位点均位于 BRAF 基