桑黄菌丝体多糖分离、纯化的结构初探.pdf

桑黄菌丝体多糖的分离、纯化及结构初探 摘要 桑黄(Phellinus linteus)是目前已知抗癌效果显著的药用真菌，其主要 功效成分是多糖。由于人类的大量采摘，使得野生桑黄资源紧缺，因此需要 人工培养来获得大量菌丝体来满足市场的需求。近年来对桑黄培养基的研究 较多，但是对桑黄多糖分离纯化的研究较少。 本文在桑黄液体培养过程中跟踪检测各项生理指标的变化，对桑黄菌丝 体主要营养成分进行测定与分析；采用超声波前处理与热水浸提相结合的方 法提取菌丝体多糖；运用大孔吸附树脂脱除粗多糖中的蛋白质；以DEAE． 纤维素阴离子交换柱和葡聚糖凝胶柱为载体分离纯化得到的多糖，对纯化后 的各组分进行紫外扫描，利用气相色谱检测多糖的单糖组成。试验主要得出 以下结论： (1)在150mL装液量、10％接种量、28℃、160r／min的培养条件下， 酵液中的pn值先下降，然后上升，最后稳定于5．5左右；还原糖含量呈“拱 开始急剧下降，96h之后趋于稳定。菌丝体主要营养成分测定结果为：粗蛋 总糖和还原糖含量分别为6．33mg／mL和0．46mg／mL。 (2)采用响应面方法研究超声波辅助提取粗多糖的工艺条件，得到最 糖得率为O．71％。 (3)静态试验筛选出D．101．I树脂对蛋白质的吸附效果最好，动态试验 结果表明：吸附饱和时间为4h，饱和吸附量为0．3mg／mL，洗脱剂以乙醇为 做洗脱剂，用量为2BV时，对蛋白洗脱率较低，且可纯化浓缩多糖。 将Ap2过SephadexG．100层析柱进一步分离纯化得两个组分Ap2．1和 Ap2—2；紫外扫描表明四个组分均无蛋白质和核酸存在；多糖的四个组分中， Ap2．1和Ap2—2含量较高，所以重点探索这两个组分的结构。气相色谱分析 表明：多糖组分Ap2—1是由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖和半乳糖五种 单糖组成的；多糖组分Ap2—2是由阿拉伯糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖四种 单糖组成的。 关键词：桑黄菌丝体，液体深层培养，分离纯化，气相色谱 Ⅱ SEPAR AND ATIoN，PURIFICATIoN PRELIMINARYEXPLoRATIoNoFZ】!日E乙乙蚬7S 己刀、嗄E艺愿MYCELIA ABSTRACT PhellinuslinteusiSknownasmedicalwithremarkableanti-cancer fungi effect itsmain ismadeof now,and by efficacycompositionup TheresourcesofwildPhellinuslinteusbecome asaresultofhuman scarcity itis tocultivate artificial pickingmassively，andnecessary enoughmyceliaby cultivationto themarketdemand．Inrecent mediums satisfy years，phellinus were the of less discussed，but Was studied． widely purificationpolysaccharide Inthe ofPhellinuslinteus