芍药苷对酸敏感离子通道介导a-synuclein自噬性降解调控作用.pdf

芍药苷对酸敏感离子通道介导的小syIluclein的自噬性降解的调控作用 中文摘要 芍药苷对酸敏感离子通道介导的0【．synuclein的 自噬性降解的调控作用 中文摘要 目的： ion 观察酸敏感离子通道 Acid．sensing PF对砌P+诱导细胞损伤的保护作用及机制。 方法： PCR和免疫 第一部分：以PCI2细胞为研究对象，通过单细胞膜片钳技术，Real．time 剂狼蛛毒素 PcTxl 以及芍药苷 PF 对ASICs通道功能的调控作用。 第二部分：以PCI2细胞为研究对象，通过pH6．O酸性培养液及MPP+诱导细胞损伤， 性降解过程的影响。同时， 研究芍药苷对0【一sylluclein自噬性降解过程的干预作用及 其对mP+诱导细胞损伤的保护作用及机制。 结果： PCI2细胞上由酸诱发的电流，并存在浓度依赖性；类似地，芍药苷也以浓度依赖性 的阻断ASICs电流。这提示了ASICs可能是芍药苷的一个作用靶点。 I ——＼ 中文摘要 芍药苷对酸敏感离子通道介导的舡syIluclein的自噬性降解的调控作用 轻细胞损伤，发挥保护作用。而且，pH6．0酸性培养液及MPP+处理细胞24h后减少 了自噬蛋白LC3．II的表达。 而且降低d．sylluClein蛋白表达。 结论： 在PCI2细胞中，存在有ASICs家族六个亚基的表达，酸诱导后能产生电流， 蛋白的自噬性降解、抑制其在细胞内过度积聚，从而对细胞发挥一定的保护作用。 关键词：ASICs；自噬；c‘．s ，Iluclein；芍药苷；阿米洛利 作 者：孙雪 指导教师·刘春风教授 II 芍药苷对酸敏感离子通道介导的伽syrIuclein的自噬性降解的调控作用 英文摘要 on ASICsmediatesthe eⅡ．ect Paeoninorin by modulatory degradation alpha—synucleinautophagic Abstract objectiVe： merole扣1d ofASICsin me e虢ct To mech砌Sms mediatingmodulatory inVestigate PaeoIlino咖on iIl 12 by alpha-s ，Ilucleinautophagicde伊adation cells． MethOdS： PartI：T0 andAmctionofASICsiIlPC12cells，Real一timePCR iIⅣestigatethe唧ression inlmunofluorescence usedin memRNAalld ex锄ining stailling锄dwest锄blotting、Ⅳlore leVelsofASICs．The w弱 iIlthe recordingapplied protein elec仃ophysiolo舀cal m11ction．Both well-kno、Ⅳnblockcrof deteHninationofASICs Amiloride a ASICs aIld PcTx ofhomomericASIC1a used 1 aspecificantagomst channel werehere邪positiVe t0tcstⅡleactionofPFon cu玎‘舶tsiIlPCI2cells． con仃Dls proton．gated 12cell PartII：T0 thee髓ctofASICsactiVationon PC investigate autopha蹦cul眦d acidicmedi吼at6．0or and to MPP+ 1mM ．Thea—syIleXpression we托exposured pH 1evel tlleratioofLC3II／LC3I were肌alyzedbywest锄blotting，wllile廿leproliferation ofcellswereme船urcdMTT．． alld印叩tosis by ReSUItS： werc t0 ofASICsofVarious I：Difrerentmetllods Pan presence perf0册edV耐锣tlle isofo珊s ASIC4illcultured including PC12 cummtsillPCl2cellswere inhibited cells．Furthe玎【Ilore，me reversibly proton-gated PcTX blockerofASIC1 a m锄er． and 1，aspecmc a，in dose-d印eIldent by