丝素-壳聚糖共混膜颌下腺细胞体外复合培养实验及研究.pdf

目 录 一、摘要 中文论著摘………………………………………………………………………1 英文论著摘要……………………………………………………………………3 二、英文缩略语………………………………………………………………………6 三、论文 前言………………………………………………………………………………7日U舌．．…．．．．．．．．．．．．．．…．．…．．．．…．．．．．．．．…．．．．．．．…．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．…．．．．．．7 实验材料与方法…………………………………………………………………8 实验结果…………………………………………………………………………14 讨论………………………………………………………………………………20 结论………………………………………………………………………………22 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………23 五、参考文献…………………………………………………………………………24 六、附录 综述………………………………………………………………………………26 在学期间科研成绩………………………………………………………………39 致谢………………………………………………………………………………40 个人简历…………………………………………………………………………4l 目 的 fibroin-chitosanblend 探讨丝素．壳聚糖共混膜(Silk SFCS)与颌下腺细胞体外 复合培养的可行性，为进一步构建功能性的颌下腺组织提供依据。 方法 体外组织块法原代培养3天龄SD大鼠的颌下腺细胞(RSMG．cell)，免疫组 织化学方法进行细胞来源鉴定，传代。 壳聚糖共混膜体外复合培养，作为实验组。同时将2．0x104／wtl的第2代颌下腺细 胞悬液接种于培养板体外培养，作为对照组。 分别于接种后1h、2h、4h、8h、24h，测定实验组和对照组SD大鼠颌下腺细 胞的附着率。倒置相差显微镜定期观察2组SD大鼠颌下腺细胞的生长情况和形 态变化，并于复合培养的第3、7天取材，扫描电镜观察颌下腺细胞的超微结构。 MTT法分别检测2组SD大鼠颌下腺细胞的增殖情况。分别取复合培养1天到lO 天的培养上清液，测定淀粉酶含量，检测2组SD大鼠颌下腺细胞的分泌功能。 forwindows Hoechst．PI染色，检测细胞活力。采用SPSS13．0统计分析软件对结 果进行两个独立样本t检验，检验水准a=O．05，P0．05认为有统计学差异。 结 果 成功的将SD大鼠颌下腺细胞(RSMG．cell)与制备出的丝素．壳聚糖共混膜 体外复合培养。并观察到实验组于接种lh时RSMG．cell即开始附着于丝素．壳聚 h时达到60％以上，8 h时93％ 糖共混膜上，4 h时80％以上RSMG．．v,ell附着，24 左右的RSMG．cell附着。而对照组RSMG．cell2h时开始附着于培养板上，4h时 达到45％。8h时80％以上颌下腺细胞附着，24h时达95％以上的颌下腺细胞附着。 倒置相差显微镜观察2组RSMG．cell均生长良好，细胞形态无明显差异，实验组 第3天时即见RSMG．cdl伸展，细胞数量略有增加，突起开始明显。第7天时细 胞数量明显增加，伸展充分，突起明显，胞质内可见明显的分泌颗粒。颌下腺的 3种细胞即导管上皮细胞，肌上皮细胞和腺泡上皮细胞在整个生长期间呈多样性。 扫描电镜下可见复合培养7天的RSMG—cdl伸展在丝素．壳聚糖共混膜的网状结构 内，呈多角形、梭形、带有多个突起，细胞表面有许多的分泌颗粒，丝状纤维及 细胞外基质。随着复合培养时间的延长，细胞上清液中淀粉酶含量均有不同程度 RSMG．cell的细胞核呈弥散均匀的蓝色荧光。第5天时细胞的荧光量有明显增加， 第7天时细