电泳技术及临床应用.ppt

共100页 蛋白电泳技术的临床应用 蛋白电泳技术和多发性骨髓瘤简介 使用范围 电泳技术就是利用在电场作用下，由于待分离样本中各种分子带电性质以及分子的大小，形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样本进行分离、鉴定和提纯的技术。 在生化检测中常用于分离各种蛋白质！ 发展历史和常用 类型 滤纸电泳 醋酸纤维膜电泳 凝胶电泳 1、琼脂糖凝胶电泳 2、聚丙烯酰胺凝胶电泳 毛细血管电泳 电泳技术 在临床中应用 急、慢性疾病 造血系统疾病：多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症 肝脏疾病 肾脏疾病 中枢神经系统疾病：多发性硬化症 遗传性疾病：地中海贫血 代谢性疾病：糖尿病 心血管疾病：心梗、动脉硬化 恶性肿瘤 。。。。。。。 1.什么情况下必须进行电泳检测？ 总蛋白异常升高或异常下降 A/G比例变化 血液沉降速度发生异常变化 出现恶性疾病征兆 在免疫球蛋白定量检测中发现 某一种免疫球蛋白出现大量异常增加 操作步骤-仪器和电泳胶片准备 操作步骤-挂缓冲条和电泳胶片 操作步骤-点样 操作步骤-选择电泳类型 操作步骤-烘干染色 操作步骤-扫描 电泳结果 2.血清蛋白电泳看的是什么？ 含量的变化 : 条带中蛋白含量增或减 基于蛋白含量的变化, 有助于我们对以下疾病的筛查 :炎症 、营养不良、肺气肿等 性质的变化 :异常条带的出现 对异常条带的筛查,有助于我们检测下列疾病:骨髓瘤、巨球蛋白血症、细菌和病毒感染等 *在这些情况下, 必须要做其他辅助测试, 比如说免疫固定, 使用不同类型的抗血清对异常蛋白进行检测. (对于后期治疗有很重要的指导意义) 血清蛋白电泳简介 血清蛋白电泳可以对血清或其他体液中的异常蛋白质进行筛选 。 血清蛋白质在碱性条件下主要根据其所带电荷数将其分离成五种片段：白蛋白,α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白、每一区带含有一种或多种血清蛋白质。 血清蛋白电泳简介 血清蛋白成分简介—白蛋白 白蛋白（Alb）由肝实质细胞合成，分子量6.64万，等电点4～5.8，半寿期（15～19天，占血浆总蛋白的40%～60。血浆白蛋白浓度可以受饮食中蛋白质摄入的影响，在一定程度上可以作为个体营养状态的评价指标，有较广泛的载体功能。正常参考值：35～50g/L。 血浆白蛋白增高较少见，在严重失水时，对监测血浓缩有诊断意义。 低白蛋白血症，可见于： 合成减低：急、慢性肝病。 营养不良或吸收不良。 遗传性缺陷：无白蛋白血症。 组织损伤（手术或创伤）或炎症（感染性疾病）引起的白蛋白分解增加。 异常丢失：如肾病综合征、慢性肾小球肾炎、糖尿病、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、肿瘤、烧伤所致渗出性皮炎。 分布异常：如门脉高压时，大量蛋白质从血管内渗入腹腔。 血清蛋白成分简介—?α1区 α1-抗胰蛋白酶（AAT）是具有蛋白酶抑制作用的一种急性时相反应蛋白，分子量为5.5万，等电点4.8，半寿期4天，电泳中位与α1区带，是这一区带的主要组分。低血浆AAT可以发现于胎儿呼吸窘迫综合症，AAT先天缺陷易导致肺气肿和肝硬化。 α1-酸性糖蛋白（AAG）早期称之为乳清类粘蛋白，分子量4万，等电点2.7～3.5，半寿期5天，电泳位于α1区带。AAG是主要的急性时相反应蛋白，在急性炎症时增高，在风湿病、恶性肿瘤及心肌梗死患者亦常增高，在营养不良、严重肝损害等情况下降低。 α1-脂蛋白 分子量20万。在严重肝病如肝硬化时明显降低，妊娠及高雌激素血症时可轻度增加。 甲胎蛋白（AFP）主要在胎儿肝脏中合成，分子量6.9万，电泳位于α1区带。在成人AFP可以在大约80%的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现AFP阳性率为50%，在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患者亦可出现不同程度的升高。 血清蛋白成分简介—?α1区 此区显色的条带主要是： α1-抗胰蛋白酶 在一些肺病是情况下，α1-抗胰蛋白酶下降，有的时候缺如 在某些严重创伤后，此区可出现明显高峰，同时α1-抗胰蛋白酶也增高 注意： 1. α1-抗胰蛋白酶偶尔出现双峰，它预示着既有单克隆抗体成分又有α1-抗胰蛋白酶的改变。 2.一些罕见的病例中，此区带会出现另一个较宽的峰，它其实可能有甲胎蛋白的出现 血清蛋白成分简介—?α2区 结合珠蛋白（HP）在血浆中与游离的血红蛋白结合，是一种急性时相反应蛋白，分子量8.5～40万，等电点4.1，半寿期2天，电泳位于α2区带。急性时相反应中血浆HP增加，当烧伤和肾病综合症引起大量白蛋白丢失的情况下亦可见增加。血管内溶血和溶血性贫血、输血反应、疟疾时HP含量明显下降。此外，严重肝病患者HP的合成降低。 α2-巨球蛋白（AMG）是血浆中分子量最大的蛋白质，是由肝细胞与单核吞噬细胞系统中合成，分子量为62.5～80万，等电点5.4，半寿期5天，但当与蛋白水解酶结合为