糖尿病的基因诊断.ppt

＊ 《线粒体基因突变所致糖尿病发生机制及治疗进展》（马丽晶、徐勉） 《医学综述》2010年1月 ＊ 《胰岛素基因突变与糖尿病关系的研究进展》（李灿、刘丽梅） 《上海交通大学学报》2013年3月 ＊ 《胰岛素受体基因在二型糖尿病的研究进展》（毛晓明、张家庆） 《国外医学》1993年6月 ＊《葡糖糖激酶基因突变与功能学研究进展》 （沈云峰、翁建平） 《国际内科学杂志》2008年12月 Thank you! 组员： 苏文杰 王俊翔 陈天文 解心怡 朱馨玉 沈 杰 夏 波 高 进 陈 颖 曹 倩 QQ:1270939493 TelLOGO LOGO 糖尿病的基因诊断 Gene diagnosis of diabetes mellitus 基因突变 线粒体DNA(mtDNA)tRNA leu(UUR)基因的二氢尿嘧啶环上核苷酸nt3243 A ? G突变。n t3243Ay G 点突变常导致母系遗传糖尿病伴耳聋、MELAS(线粒体脑肌病、乳酸酸中毒、癫痫样发作综合征) 基因突变 基因突变 基因突变 胰岛素基因突变可以导致异常胰岛素病、永久性新生儿糖尿病( PNDM) 、青少年成人起病型糖尿病( MODY) 以及部分自身抗体阴性的1 型糖尿病。 基因突变 应用聚合酶链反应—单链构象多态性(PCR—SSCP)及等位基因特异性寡核苷酸斑点杂交技术对INS基因进行分析，发现有Arg65→His、Arg65→leu以及Hisl00→Asp等点突变。 对INSR基因的全部外显子筛查后发现，外显子2，3，8，9，13，17中有无义突变，外显子20中存在一个异质性点突变。 该突变位于酪氨酸激酶区内，影响受体细胞内亚基的结构，是引起遗传性胰岛素抵抗（insulin resistance ，IR）的主要原因。 基因突变 基因突变 基因突变 基因突变 1．己糖激酶Ⅱ(hexokinaseⅡ，HK2)基因突变 2．磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶基因突变 3．糖原合成酶(glycogen synthetase，GSY)基因突变 4．载脂蛋白基因群及低密度脂蛋白受体基因突变 糖尿病相关基因诊断技术 ＊ C肽试验 ＊ PCR-SSCP ＊ PCR-DGGE C肽是胰岛β细胞的分泌产物，它与胰岛素有一个共同的前体——胰岛素原。一个分子的胰岛素原在PC2和PC3的作用下，裂解成一个分子的胰岛素和一个分子的C肽，因此在理论上C肽和胰岛素是等同分泌的，血中游离的C肽生理功能尚不很清楚，但C肽不被肝脏破坏，半衰期较胰岛素明显为长，故测定C肽水平更能反应β细胞合成与释放胰岛素功能。? C肽水平测定 PCP-SSCP 原理： 在非变性条件下，DNA单链可自身折叠形成具有一定空间结构的构象。这种构象由DNA单链碱基决定，其稳定性靠分子内局部顺序的相互作用（主要为氢键）来维持。相同长度的DNA单链其顺序不同，甚至单个碱基不同，所形成的构象不同，电泳迁移率也不同。 PCR-SSCP 步骤： PCR-SSCP PCR-DGGE DGGE(变性梯度凝胶电泳) 是一种根据DNA片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统。核酸的双螺旋结构在一定条件下可以解链，称之为变性。当一双链DNA片段通过一变性剂浓度呈梯度增加的凝胶时，此片段迁移至某一点变性剂浓度恰好相当于此段DNA的低熔点区的Tm 值，此区便开始熔解，而高熔点区仍为双链。这种局部解链的DNA分子迁移率发生改变，达到分离的效果。Tm的改变依赖于DNA序列，即使一个碱基的替代就可引起Tm值的升高和降低。 PCR-DGGE 步骤： PAX 6 PD LNK PD PD HD LNK LNK HD HD PST 240aa 266aa 269aa 420aa PAX 6 PAX 6 胰腺的发育 Pax6成对结构域PD 和同源结构域HD 高血糖素启动子反应元件G1和G3 Pax6 的转录活性被激活 直接相连、相互作用, 激发Pax6的活 性空间构象 HD的结合位点 PD 的结合位点 PAX 6 Pax6对高血糖素的作用 此外，过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxidase proliferato