红细胞血型血清学技术的发展和应用.ppt

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红细胞血型血清学技术的发展和应用.ppt

二十一世纪临床输血工作 输血安全和输血相容性实验 红细胞血型相容性实验规范化 输血传播病原微生物检测 输血相容性实验 血型定型:抗原、基因水平 抗体检测:筛检、鉴定、确证 交叉配血:完全和不完全抗体 血型血清学免疫基础概述 抗 原: (1)免疫原性 (2)反应原性/抗原性 根据抗原来源与机体的亲缘关系分类: ①异种抗原 ②同种异型抗原:ABO、Rh、HLA等 ③自身抗原 ④异嗜性抗原 血型血清学免疫基础概述 抗体: 抗体都是免疫球蛋白 并非所有免疫球蛋白都具有抗体活性 Ab是功能描述,Ig是化学结构描述 分泌型Ig(sIg)和膜型Ig(mIg) Ig不耐热,在60-70℃被破坏 Ig能被多种蛋白酶水解 血型血清学免疫基础概述 类:根据CH抗原特异性的差异,将Ig分为IgG、IgM、IgA、IgD、IgE 五类 亚类:根据CH(主要是铰链区)AA和二硫键的差异 IgG: IgG1、IgG2、IgG3、IgG4 IgA: IgA1、IgA2 IgM: IgM1和IgM2 型:根据CL化学结构与抗原性的差异 ?和?型 亚型:?1、?2、?3、?4 血型血清学免疫基础概述 补 体: 主要由肝细胞、巨噬细胞等合成,半衰期约1天 多为糖蛋白,占血清蛋白总量的10%左右 血清中各成分含量不等,C3含量最高 正常生理情况下,以非活化形式存在于血清中 性质不稳定,加热56℃ 30min失活 对温度、酸、碱、蛋白酶、乙醇等敏感 血型血清学免疫基础概述 补体系统的三条激活途径 经典途径(classical pathway) 旁路途径(alternative pathway) MBL途径(MBL pathway) ( MBL:甘露糖结合凝集素) 补体系统的激活是在某些激活物质的作用下,各补体成分按一定顺序,以连锁的酶促反应方式依次活化,并表现出各种生物学活性的过程,故亦称为补体级联反应 血型血清学免疫基础概述 抗原抗体反应 是抗原和相应抗体之间的特异性结合反应 既可发生在体内,也可发生在体外 一般规律: ①特异性 ②可逆性 ③阶段性 ④比例性 血型血清学免疫基础概述 特异性:由抗原决定簇和抗体分子超变区之间空间结构的互补性决定 可逆性(reversibility):指Ag与相应Ab结合成IC后,在一定条件下可解离为游离抗原与抗体的特性 IC解离取决于: ①抗体对相应抗原的亲和力 ②环境因素 血型血清学免疫基础概述 环境因素:pH值、离子强度、温度等 常用于解离IC的物质有:3M硫氰化钾、pH2.4 0.1M甘氨酸、7M尿素等 解离后抗原、抗体仍保持原有特性 血型血清学免疫基础概述 阶段性 第一阶段:特异性结合阶段 ①反应速度快,几秒钟或几分钟即可完成 ②不出现肉眼可见反应 第二阶段:可见阶段,表现为凝集、沉淀、补体结合等反应 ①反应进行慢,需要几分钟、几十分钟或更长 ②受电解质、温度、酸碱度等多种因素影响 血型血清学免疫基础概述 比例性(proportionality) : 最适比或等价点:指抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系,只有当二者浓度比例适当时,才出现可见反应 等价带:抗原与抗体分子比例合适的范围 带现象:Ag与Ab比例不适而不出现可见反应 前带(prozone) :抗体过量时 后带(postzone) :抗原过量时 血型血清学免疫基础概述 抗原抗体结合力: 抗原和抗体的结合是互补性的特异性结合 不形成牢固的共价键,通过非共价键结合 涉及几种分子间的作用力: ①静电引力 ②范德华力 ③氢键结合力 ④疏水作用力 血型血清学免疫基础概述 影响抗原抗体反应的因素: 一、反应物自身因素: 抗原:理化特性、Ag决定簇数量、Ag决定簇种类 抗体:来源、特异性与亲和力、浓度 二、环境条件: 电解质:0.85%NaCl 酸碱度:pH 6~9 温度:15 ℃ ~ 40℃ 血型血清学免疫基础概述 检测抗原抗体反应的基本技术: 凝集反应(又称直接凝集反应) 颗粒性Ag + 相应Ab→→→→颗粒性团块样凝集 沉淀反应 可溶性Ag + 相应Ab→→→→免疫复合物出现沉淀 溶血反应 RBC血型Ag + 相应血型Ab→→→→溶血(红细胞破坏) 红细胞血型血清学概要 (一)血型定义 血型是血液系统的一种遗传多态性,是产生抗原抗体的遗传性状。 (二)血型抗原 红细胞上的化学构型,必须

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