马铃薯m病毒重组cp抗血清的制备学士学位论文.docVIP

青岛农业大学 毕业论文（设计） 题 目： 马铃薯M病毒重组CP抗血清的制备 姓 名： 学 院： 生 命 科 学 学 院 专 业： 生 物 技 术 班 级： 2010 级 3 班 学 号： 指导教师： 郭 宝 太（教授） 完成时间： 2014.6.15 2014年6月15日 目录 摘要 1 Abstract. 2 引言 3 1 材料与方法 5 1.1 实验材料 5 1.1.1实验菌株 5 1.1.2主要试剂与仪器 5 1.1.3 培养基 5 1.1.4主要试剂配方 5 1.2方法 8 1.2.1 PVM-CP基因原核表达的诱导与鉴定 8 1.2.2菌体总蛋白的提取和包涵体的溶解 8 1.2.3 PVM重组CP的纯化 9 1.2.4 纯化蛋白的SDS检测 9 1.2.5蛋白的透析、浓缩与定量 9 1.2.6 PVM重组CP抗血清的制备 9 1.2.7 PVM的ELISA测定 10 2 结果与分析 10 2.1目的蛋白的诱导表达与纯化 10 2.2蛋白的透析、浓缩与定量 11 2.3 抗血清效价的测定 12 2.4 PVM的ELISA测定 13 3 讨论 13 3.1 马铃薯病毒的检测方法 13 3.2 目的蛋白的纯化与定量 14 3.3 重组CP途径与本研究的创新点 14 3.4 马铃薯病毒抗血清的生产与应用 致谢 15 参考文献 15 马铃薯M病毒重组CP抗血清的制备 生物技术专业 刘 扬 指导教师 郭宝太 摘要：用IPTG诱导重组菌BL21(pET22b-PVM)中M病毒CP基因的原核表达，用溶菌酶法提取菌总蛋白，然后利用镍离子亲和层析纯化重组蛋白，获得了高纯度的PVM重组CP。利用高纯度重组CP免疫兔制备出了抗血清，间接ELISA法测定显示抗血清的效价为1：64K。本研究利用重组CP制备出PVM高的抗血清，为进行PVM的ELISA检测奠定了基础，同时也为PVM的ELISA试剂盒的组装与应用奠定了基础。 关键词：马铃薯M病毒； CP基因；原核表达； 重组CP；抗血清制备 Preparation of antiserum against recombinant coat protein of potato virus M Student majoring in biotechnology Liu Yang Tutor Guo Baotai Abstract: The recombinant bacterium strain BL21(pET22b-PVM) was induced by IPTG, a 36KD specific protein band was found in the SDSpattern of total protein, its size was the same as expected, the result showed that the prokaryotic expression of CP gene of potato virus M (PVM) was successful. Total cellular protein of the recombinant bacterium was extracted by lysozyme method and then the PVM recombinant CP was purified with nickel iron affinity chromatography column. Antiserum was prepared by injection of rabbits with the high-purity recombinant CP. Indirect ELISA detection indicated that the titer of the antiserum was 1:64K. Positive reaction was observed between the prepared antiserum and PVM positive sample in ID-ELISA. The antiserum prep