流式细胞基本原理和在白血病中应用.ppt

部分病例运用免疫标记物难以将恶性成熟T淋巴细胞从正常T淋巴细胞中精确鉴别(反应性或克隆性)。 原因： 1.肿瘤细胞被反应性T细胞掩盖 2.CD8+占优势群体还见于：V感染(AIDS,EBV)，BMT后 临床特点对诊断更为重要！ 流式诊断NK细胞淋巴瘤 典型：CD2+,CD16+,CD56+,CD122+,CD3- 没有特征性抗体区分肿瘤和反应性NK细胞： 数量以及FS KIR：KIRs、CD94/NKG2； 均一性表达KIR同种型 四.阵发性睡眠性血红蛋白尿 阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH） 糖基化磷脂酰肌醇锚（GPI ）连接的锚连蛋白缺乏 补体介导的血管内溶血为特征的获得性造血干细胞克隆性疾病 磷脂酰肌醇聚糖A(PIG－A) 基因突变 PIG－A 基因突变 对补体敏感性增高 溶血 锚连蛋白：补体调节蛋白CD55、CD59、CD16、CD24、CD14、Flaer等 样本收集： 优先选择外周血，不推荐骨髓 抗凝剂: EDTA、肝素 RBC最多可存放至7天 WBC必须在48小时内检测（粒细胞上的抗原表达和散射会随着时间而改变） CCS指南推荐对2种细胞系进行检测 标本类型 抗凝剂 标本储存 常规检测：敏感度1%，获取5000个目的细胞 高敏检测：敏感度0.01%，获取250，000个目的细胞 中性粒细胞：必做 红细胞：中性粒细胞检出PNH克隆时必做，或全部标本都做，但单独检测不推荐 单核细胞：可提供稳定的结果 淋巴细胞：不推荐 细胞获取 目的细胞 抗体的选择 仅检测CD55/CD59------不推荐 敏感性：5-10% (Sutherland and al,Cytometry Part B 72B:167-177) Flaer-----组成高特异性的 PNH Panel 红细胞分析： 优点：与 WBC相比，RBC检测能更好地鉴别II型细胞。 缺点：输血和溶血会造成PNH克隆大小检测值偏低。 单检测红细胞不能充分评估PNH I型： 正常红细胞 II型：CD59部分缺失的PNH克隆 III型：CD59完全缺失的PNH克隆 同个患者的红细胞和粒细胞检测结果 粒细胞PNH克隆： 54.5% 红细胞PNH克隆：6.1% 溶血/输血对PNH克隆大小的影响 红细胞分析-----抗体选择和分析 CD59优于CD55 CD59在红细胞上的表达水平远高于CD55 结果分析： PNH细胞比较多时，适合使用直方图 异常细胞数少时，适合使用散点图 同一个患者，CD59能区分出II型和III型细胞，CD55则不能 红细胞PNH克隆很少时，适合散点图分析 中性粒细胞和单核细胞都可以检测。 不适宜采用淋巴细胞 白细胞分析----- 检测PNH克隆最好的方法 CD59—最早用于检测粒系PNH克隆的标记物 FLAER -能和WBC上所有的GPI锚连蛋白特异性结合：当前成为最佳标记物 CD14是表达在单核细胞上的GPI锚连蛋白，用于检测单核细胞的PNH克隆。 CD24是表达在粒细胞上的GPI锚连蛋白，用于检测粒细胞的PNH克隆。 白细胞分析----- 检测PNH克隆最好的方法 什么是FLAER? FLAER (FLuorescent AERolysin），荧光标记的嗜水气单胞菌溶素，它不是单克隆抗体，而是灭活的细菌蛋白质，能和WBC上所有的GPI锚连蛋白特异性结合。 FLAER CD24 FLAER CD14 ICCS PNH指南:WBC检测的组合 Colors 细胞 类型 1 2 3 4 5 6 3 color G FLAER CD24 CD15 3 color M FLAER CD14 CD33 4 color G FLAER CD24 CD15 CD45 4 color M FLAER CD14 CD33 CD45 4 color G+M FLAER CD24 CD14 CD33 5 color G/ M FLAER CD24 CD14 CD15/ CD33 CD45 5 color G+M FLAER CD24 CD14 CD15 CD33 6 color G+M FLAER CD24 CD14 CD15 CD33 CD45 Guidelines for the diagnosis and monitoring of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria and related disorders by flow cytometry. Borowitz MJ, Craig FE, DiGiuseppe JA, Illingworth