ESI浓度型液相检测器使用综述.ppt

ESI的性质 ESI通常为浓度型检测器 2.1mm i.d.柱，流动相流速400mL/min, 分流对信号的影响 对于上述表观浓度型现象的解释有两种假设。第一种是随着流速的降低，离子化效率增加，但是，随着流速的降低，进入喷雾器的质量流速也比例地降低，因此，信号保持恒定。 ESI的浓度响应说明： 内径较细的色谱柱具较高的绝对灵敏度 对于一定量的样品，较低的流速意味着较长的信号采集时间 柱后分流不导致明显的信号丢失 分流器的好处 可同时收集经色谱纯化的样品 可同时使用与质谱仪平行的另一检测器 以较低的流速通过离子源以增加离子化效率 因为只有一小部分样品进入离子源，因而有利于保持质谱仪清洁 灵敏度及线性范围 ESI/MS的灵敏度取决于： 柱内径、流速和溶剂组成 待测成分的化学性质，尤其是其表面活性，因为ESI的机制假定为一种表面离子化技术，具表面活性的化合物（例如去污剂）用ESI 时具最高的响应。这些化合物也是对其它表面活性较弱的分子的最有效的离子化抑制剂，因为它们占据了液滴表面 分子能在溶液中生成离子也很重要，酸性化合物主要检测其负离子，碱性化合物检测其正离子 。 分子可通过多种途径取得电荷，如加合物（adduct）的形成（M+NH4+，M+K+，M+Na+，M+Ac-等）及在喷雾器的金属/液体表面氧化/还原。 ESI/MS的线性范围约103至104，取决于样品的性质和溶液中的其它带电物质。当样品浓度约10-5 moL/L时，样品离子信号达到上限，这是由于离子競争有限的微滴表面电之故。继续增加溶液中的样品浓度，不能使处样品离子在表面中继续增加。为了进一步扩大线性范围，主要是要设法降低检测限。 从LC转换至LC/MS 将现有的HPLC方法用于LC/MS时应注意： 硫酸盐、磷酸盐和硼酸盐等非挥发性缓冲剂, 需用挥发性缓冲剂，如醋酸铵、甲酸铵、醋酸、三氟乙酸（TFA）、七氟丁酸（HFBA）、氨水氢氧化四丁基铵（TBAH）等代替。注意离子强度是个重要参数。 pH值，当用挥发性酸、碱，如甲酸、乙酸、TFA和氨水等代替时，通常应保持不变。 离子对试剂，应采用挥发性的，如HFBA，TBAH。但是，更换离子对试剂后，很难达到相同的保留时间。分子量较大的离子对试剂干扰较大。 有机溶剂，大多数LC用的溶剂，尤其是反相色谱流动相，与LC/MS相匹配。非极性溶剂只能用于APCI。 大多数色谱柱与LC/MS相匹配，但离子交换柱因用非挥发性流动相添加剂及高离子强度可能产生困难。疏水相互作用色谱需用盐浓度梯度洗脱生物分子，非挥发性盐与ESI/MS不相匹配。 柱后修饰： 调节pH值以优化正或负离子检测； 添加异丙醇以利于含水溶剂的去溶剂化和稀释缓冲盐以达到ESI/MS正常工作可接受的程度； 添加醋酸钠（约50?mol/L ）以使缺乏或只有弱质子化位点的样品阳离子化（M+Na+）； 用“TFA Fix”改善灵敏度；用“TFA Fix”改善灵敏度； 增加流速，以达到稳定的喷雾。如填充毛细管柱色谱或毛细管电泳，常需柱后添加适当溶剂（补足液流）以利工作； 柱后分流，降低流速，这常在采用直径较大的色谱柱，流速较高时使用。 柱后衍生化，以提高质谱响应。 TFA Fix CE/ESI/MS CE/MS，在某种意义上，是近于理想的联用技术：CE分离分析离子基本上基于其质荷比及其在溶液中的不同淌度，而MS分离或分析离子基于其在气相中的质荷比的差异。但是，这两种方法是在两种完全不同的环境中研究离子的运动，CE采用中等电导的液体系统，而MS采用高真空条件。 与LC/MS接口相比较，有其不同的要求，例如：CE流速很低，缓冲系统具中等电导，分析毛细管两端均需保持电接触以确定CE电场梯度，溶质区带的毛细管外展宽必须减低至最小以保持高分离效能等。 CE/ESI/MS的同轴夾套液流接口（A）及液体汇合接口（B） 在夾套液流接口中的夹套液体通常为甲醇、甲氧基甲醇、乙腈并含10~20%甲酸、乙酸或水，在CE毛细管（约140~180?m o.d.）和熔融二氧化硅或不锈钢毛细管（约250?m i.d.）间流过。 对于ESI 正离子操作方式，+2~5kV的电压加在夾套液体上，夾套液体的流速为2~5?L/min。 液体汇合接口中，毛细管末端的电接触可由贮槽液体建立（插入一电极），贮槽液环绕着分析毛细管和传输毛细管。两毛细管之间的间隙调整至10~20?m, 以兼顾既要有足够的补足液体吸入传输毛细管，又要避免被分析成分扩散入贮槽导致损失。补足液体流是由重力驱动及高速雾化气流产生的吸力的综合作用产生的。 E