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《细胞生物学》 第一章 历史与展望 细胞生物学研究细胞的结构、功能和生活史。 当代生物科学四大基础学科:细胞,分子,神经生物学和生态学 1.细胞生物学的研究内容分三个层次： 1）显微水平，光学显微镜下可见的结构。 2）超微水平，电子显微镜下可见的结构。 3）分子水平，细胞结构的分子组成，及其在生命活动中的作用。 2.细胞的发现:1590年J. 和Z. Janssen父子制作第一台复式显微镜，放大倍数不超过10倍。 1665年英国人Robert Hooke出版《显微图谱》。观察了软木，并首次用cells来描述“细胞”。 1831年R. Brown在兰科植物表皮细胞内发现了细胞核。 1836年GG. Valentin在动物神经细胞中发现了细胞核与核仁。 3.细胞学说 Cell Theory通常认为施莱登（MJ. Schleiden）和施旺（T. Schwann）正式提出了细胞学说。 1838年Schleiden发表“植物发生论” ;Schwann提出了“细胞学说”（Cell Theory) ；1939年发表了“关于动植物结构和生长一致性的显微研究”。 4.细胞超微结构研究:1932年德国人E. Ruska和M. Knoll发明透射电镜,Cytology发展为Cell Biology。 5.分子细胞生物学时代:1953年，JD. Watson 和FHC. Crick提出DNA双螺旋模型。与Wilkins分享1962 年诺贝尔生理学与医学奖 。1958 年Crick 提出分子遗传的“中心法则”。1961-1964年Nirenberg 等破译遗传密码。 国家科技图书文献中心（NSTL） EBSCOhost外文全文数据库 Springer外文电子期刊 第二章细胞生物学实验技术 光学显微镜：以可见光（或紫外线）为光源。电子显微镜：以电子束为光源。 1.光学显微镜:（1）普通光学显微镜: 构成： ①照明系统 ②光学放大系统 ③机械装置 （2）荧光显微镜（3）激光共聚焦扫描显微境 LCSM（4）暗视野显微镜（5）相差显微镜（6）偏光显微镜（7）微分干涉差显微镜（DIC）（8）倒置显微镜 2.电子显微镜（1）透射电子显微镜TEM（2）扫描电子显微镜（3）扫描隧道显微镜 1）超薄切片：用于电镜观察的标本须制成厚度仅50nm的超薄切片，用超薄切片机制作。通常以锇酸和戊二醛固定样品，丙酮逐级脱水，环氧树脂包埋，以热膨胀或螺旋推进的方式切片，重金属（铀、铅）盐染色。 2）负染技术：用重金属盐(如磷钨酸) 染色；吸去染料干燥后，样品凹陷处铺了一层重金属盐，而凸的出地方没有染料沉积，从而出现负染效果，分辨力可达1.5nm左右。 3）冰冻蚀刻 freeze-etching：亦称冰冻断裂。标本置于干冰或液氮中冰冻。然后断开，升温后，冰升华，暴露断面结构。向断面喷涂一层蒸汽碳和铂。然后将组织溶掉，把碳和铂的膜剥下来，此膜即为复膜（replica） 断面的三种处理方法：蚀刻、不蚀刻、深度蚀刻 3.显微操作技术:是在倒置显微镜下利用显微操作器进行细胞或早期胚胎操作的一种方法。包括细胞核移植、显微注射、嵌合体技术、胚胎移植以及显微切割等。 第三章 细胞培养与细胞杂交 1.细胞培养技术（cell?culture）是指细胞的体外培养。即在无菌条件下，把动物和植物的细胞从有机体分离出来，在模拟体内的环境中，给以营养物质，使细胞不断生长，繁殖或传代，借以观察细胞生长，分裂以及细胞衰老，死亡等生命现象。 2.细胞株（cell?strain）：从原代培养细胞群中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群，能够繁殖50代左右，在培养过程中其特征始终保持。 3.细胞系（cell?line）：从肿瘤组织培养建立的细胞群或培养过程中发生突变或转化的细胞，在培养条件下可无限繁殖? 4.克隆（clone）：亦称无性繁殖系或简称无性系。对细胞来说，克隆是指由同一个祖先细胞通过有丝分裂产生的遗传性状一致的细胞群。 5.动物细胞培养：细胞培养方式大致可分为两种:群体培养（mass?culture）、克隆培养（clonal?culture） 群体培养：将含有一定数量细胞的悬液置于培养瓶中，让细胞贴壁生长，汇合后形成均匀的单细胞层。 6.细胞融合：通过培养和诱导，两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程称为细胞融（cell?fusion）或细胞杂交（cell?hybridization）。 7.基因型相同的细胞融合成的杂交细胞称为同核体（homokaryon）；来自不同基因型的杂交细胞则称为异核体（heterokaryon）。 8.同种细胞在培养时2个靠在一起的细胞自发合并，称自发融合；异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合，称诱发融合。 9.诱导细胞融合的方法：生物方法（病毒）、化学方法