LC现场培训教程.ppt

内容 一、色谱技术回顾 二、高效液相色谱法及色谱基本语言 三、培训设备 四、溶剂准备 五、LC3000色谱仪组成 六、LC3000系统基本操作 七、HPLC维护知识 色谱分离的机理 色谱技术回顾 什么是高效液相色谱 High Performance Liquid Chromatography 高效液相色谱法，简称：HPLC 是一种区别于经典液相色谱；基于仪器方法的高效能分离手段： 高性能的色谱柱，高精度、耐高压的输液泵以及高灵敏度的检测器…… 广泛应用于各个领域： 医药 / 环保 / 石化 / 生命科学 / 食品及农业…… 与经典液相色谱（柱色谱）比较 色谱图：HPLC图形结果（Chromatogram） 液相色谱图相关术语 峰高 － Peak Height 峰最大值到峰底的距离 半（高）峰宽－Peak Width at Half Height 通过峰高的中点作平行于峰底的直线，其与峰两侧相交两点之间的距离 峰面积 － Peak Area 峰与峰底之间的面积,又称响应值 液相色谱图相关术语 基线 － Baseline 在正常操作条件下，仅由流动相所产生的响应信号的曲线 基线飘移 － Baseline Drift 基线随时间定向的缓慢变化 基线噪声 － Baseline Noise 由各种因素所引起的基线波动 液相色谱图相关术语 死体积，V0 － Dead volume 不被固定相滞留的组分，从进样 到出现峰最大值所需的流动相体积 保留体积，VR－Retention volume 组分从进样到出现峰最大值所 需的流动相体积 柱效–色谱柱的分离效率 理论塔板数–用于定量表示柱效，假设一根柱子可以分为N段，在每段内组分在两相间很快达到平衡，把每一段称为一块理论塔板。设柱长为L，理论塔板高度为H，则H=L/N，式中N为理论塔板数。 ★★经验计算公式：N=L/2d (d为填料的直径) 理论塔板数N与柱长有关，当比较两不同长度的色谱柱的柱效时，应当比较它们在相同柱长下的N值。 柱效测试参考方法 条件（Φ100*250mm制备柱）： 流 速：150--250mL/min 流 动 相：CH3OH （ 90%CH3OH- H2O） 　 进样体积：1-2mL 检测波长：254nm 样品名称：苯、甲苯、萘、蒽 样品浓度：1mg/ml(1ml/100ml) 环境温度；柱压；柱效 ；拖尾因子 液相色谱方法开发 液相色谱实验所需的基本参数 流动相：种类及配比，等度或梯度 固定相：色谱柱类型及内径、长短 流动相输送系统参数：流速 检测器参数：紫外检测波长，灵敏度等 温度控制 进样量 以上参数即构成一个具体的HPLC方法；亦称色谱条件 线性色谱与非线性色谱比较 线性色谱的特点有三： 保留行为（时间，体积）只与样品本身有关，与浓度无关。 峰高或峰面积与浓度成比例，在线性范围里 色谱峰是高斯峰，对称分布 非线性色谱的特点也有三： 一．色谱峰保留行为（时间，体积）不仅与样品本身有关，还与浓度无关。 二．峰高或峰面积与浓度不成比例。 三．色谱峰是不对称的 三、培训设备 二、培训设备 CXTH LC3000色谱仪 P3000高压输液泵 UV3000紫外检测器 7725i手动进样阀 T2000柱温箱（可选） C18色谱柱 250×4.6 5u （可选） 其它色谱基本条件（流动相准备、电脑和实验台等） 四、溶剂准备 1、条件：色谱级纯或者优级纯甲醇或者乙腈（ACN）、二次蒸馏水 2、流动相的过滤和超声 3、样品的前处理和过滤 五、LC3000色谱仪组成 1、P3000泵 P3000泵界面和基本操作 泵内部结构 工作原理简介图 泵头以及传动结构图 液相色谱泵主要耗材 单向阀及内部结构 基本操作 泵的基本操作可以通过CXTH-3000工作站（推荐使用）或者泵仪器面板控制。 以下是泵面板的基本控制按钮 PUMP/STOP 键：按一下该按键可以运行泵，再按一下停止泵运行。 START/HOLD键：按一下该键运行预先设定的程序链（PROGRAM）。 再按一下保持此时的程序运行 PURGE键：冲洗键。按一次泵按照（SYSTEM SETING）系统设定中 设定冲洗流量运行冲洗。 再按一次泵停止冲洗。作用：冲 洗泵头气泡 和快速更换流动相。 DEL键：退出键