—液相色谱法.ppt

第十章 高效液相色谱法 一、高效液相色谱法概述 气相色谱：流动相为气体 液相色谱：流动相为液体，70年代以后，在高压下输送流动相，称之为高效液相色谱（高压液相色谱），简称为HPLC。 二、高效液相色谱仪 2.1 高压输液系统 贮液器：贮存流动相，由玻璃、不锈钢或氟塑料作成（0.5~2L） 高压泵： 作用：将贮液器中的流动相以高压（150～350×105 Pa）形式连续不断地送入柱系统 性能：高压、恒流、压力变化小、流量范围可调、耐腐蚀、密封性好 主要类型：往复式柱塞泵（恒流） 2.2 进样系统 作用：把分析试样有效地送入色谱柱 进样方式：微量注射器；进样阀（耐高压的六通阀：自动化进样、重现性好） 2.3 分离系统（色谱柱） 作用： 实现组分的分离 性能：直形（由不锈钢制成）；内径：2~6mm；长度：10~50cm 三、HPLC的主要类型及分离原理 流动相要求： 流动相纯度高 不使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂 能溶解样品，但不与样品发生反应 粘度小，以此提高柱效 与所选用的检测器匹配 液固色谱（LSC, liquid-solid adsorption chromatography） 固 定 相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂。 流 动 相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸； 固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配； 流 动 相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极 性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之，流 动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）。 正相与反相的出峰顺序相反； 固 定 相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶 （担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。 固定相：将固定液化学键合于载体（硅胶）表面形成固定相 固定相类型： 极性固定相：正相色谱 以极性有机基团如胺基（-NH2）、腈基（-CN）、醚基（-O-）等键合在硅胶表面制成的 非极性固定相：反相色谱 反相色谱法最常用的固定相是C18 （十八烷基硅烷）、 C8 （辛烷基）和苯基键合相的填料。 空间排阻色谱 固定相：凝胶，含有许多不同尺寸的孔穴 分离原理：基于分子尺寸的大小进行分离，样品组分与固定液间不存在相互作用现象 分离次序：分子量大的先排出，分子量小的后排出 固定相的排阻极限：因分子量过大而不能部分地进入某一给定固定相孔内的最小的样品粒子的分子量 固定相的渗透极限：因分子量过小而能完全进入某一给定固定相最小孔内的最大的样品粒子的分子量 (2) 特点 保留时间为分子尺寸的函数，因此有可能提供分子结构的某些信息。 保留时间短，谱峰窄，易检测，可用灵敏度较低的检测器。 固定相与分子间作用力趋于零，即柱子不能很强地保留组分，柱寿命长 不能分辨大小相近的化合物（不可分离复杂化合物），只分离分子量相差10%以上的物质，主要用于获得分散性聚合物相对分子质量的分布情况。 水中阴阳离子测定的样品前处理 1.纯净水中阴离子测定--------直接进样 2.自来水\地下水中阴离子的测定--------0.45um滤膜过滤后直接进样分析 3.地表水\生活污水中阴离子测定---------离心过滤后,用C18与0.45um滤膜过滤后进样分析 4.工业废水----------离心过滤后,用On-Guard H柱与0.45滤膜过滤进样 （4）应用：在IonPac AS9-HC上分离消毒副产物 色谱柱：IonPac AG9-HC, AS9-HC 淋洗液：9 mmol/L Na2CO3 流　速：1 mL/min进样量：25 μL 色谱峰： 1. 氟离子 3 mg/L 2. 亚氯酸根 10 3. 溴酸根 20 4. 氯离子 6 5. 亚硝酸根 15 6. 溴离子 25