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(2)差示折光检测器： 偏转式差示折光检测器光路图 光源1射出光线由透镜2聚焦,透过遮光板4的狭缝,经反射镜5反射后,由透镜6汇聚两次,穿过工作池7和参比池8 该检测器是继UV检测器之后，第二种广泛使用的液相色谱检测器。图示： 被平面反射镜9反射出来，成像于棱镜11的棱口上，光束均匀分为两束，到达对称的光电管12上。 如果工作池和参比池皆通过纯流动相，光束无偏转，左右两个光电管的信号相等； 如果工作池中有试样通过，由于折射率改变，造成光束偏转，从而使到达棱镜的光束偏离棱口，左右两个光电管接受的光能量不等，其差值正比于试样的浓度。 每种物质都有各自不同的折射率，因此都可用差示折光检测器进行检测，所以这是一种通用型的浓度检测器。灵敏度为10-7g?mL-1。 缺点：对温度变化很敏感，此检测器不能用于梯度洗提。 §4-3 HPLC的理论基础 高效液相色谱法的理论基础基本与气相色谱法相同，但也有不同之处。两者的主要区别就在于流动相的不同。 根据速率理论，HPLC中影响柱效的因素如下： 涡流扩散项He He=2?dp 其含义与气相色谱法相同。 2.纵向扩散项 Hd 式中Cd为常数，Dm为分子在流动相中的扩散系数。 由于分子在液体中扩散系数比在气体中要小4~5个数量级，当流动相的线速度＞0.5cm?s-1时，该项对H 的影响可忽略。而GC中该项的影响很大。 3.传质阻力项 与GC类似，也分为固定相传质阻力项和流动相传质阻力项。 固定相传质阻力Hs—主要发生在液液分配色谱中，类似于气液色谱中的液相传质阻力项。 式中Cs 为常数(与k有关)；Ds为组分分子在固定液内的扩散系数； 由上式可见，Hs与GC中的CL含义是一致的。 流动相传质阻力—HPLC中该项有两种形式，分为在流动的流动相中和滞留的流动相中的传质阻力，分别用Hm和Hsm表示。 式中Cm是常数(与k有关)，Dm 为组分分子在流动相中的扩散系数。 式中Csm为一常数； 综上所述，由柱内色谱峰扩展所引起的塔板高度的变化可归纳为： 将上式简化： H = A + B/u + Cu 总结：HPLC速率方程式形式与GC基本一致，其主要区别在于HPLC纵向扩散项(Hd )可以忽略不计，影响柱效的主要因素是涡流扩散项He和传质阻力项Hm、Hsm 、Hs。 可见，减小填料的孔径和粒度，采用低粘度及低流速流动相，适当提高温度等方法可提高柱效。 由H?dp2可知，其中减小填料粒度是提高柱效的最有效途径；因孔穴深度也同时随之减小。 此曲线分为三部分： AB段―曝光不足段，该段曝光量较低，感光板黑度随曝光量变化较小，所以不适合分析用。 BC段―曝光正常段，S∝lgH，定量测定工作应在这一区域进行，测定的灵敏度、准确度都较好。 CD段―曝光过度段，此段曲线表明曝光量虽然很足，但黑度值不再增加，所以也不适于分析用。 而光谱的定量分析应在正常曝光段内进行 ，因为该区域 S∝lgH，斜率恒定。令此斜率为?，则?=tg?，此处?称为感光板的反衬度，是感光板的重要特性之一，在曝光量变化相同数值的情况下，??的感光板，S变化量大；??的感光板，S变化量小。 BC部分延长线在横轴上的截距为lgHi，此处Hi称为乳剂的惰延量，Hi?，感光板越不灵敏； BC部分在横轴上的投影bc称为乳剂的展度，展度值的大小决定了定量分析时感光板所能测定的含量范围。在BC部分，S与lgH之间的关系为： S= ?(lgH?lgHi)= ?lgH ? ?lgHi 对某感光板的乳剂层，?lgHi为常数，而： H=E?t(E为照度)，E与I相当， ∴ S= ?lgE?t? ?lgHi= ?lgI?t? ?lgHi 令：?lgHi=i 那么对于分析线和内标线的黑度分别设为S分和S内，则得到： S分= ?分lgI分?t分?i分 S内= ?内lgI内?t内?i内 ∵在同一块感光板上，t值相同，当分析线对的波长、强度、宽度相近，且它们的黑度值均落在曲线的直线部分时，则：?分=?内=?, i分=i内=i 分析线对的黑度差?S为：S分?S内=?lgI分/I内=?lgR ∴ ?S= ?blgc+?lgA 此公式即为用内标法进行定量分析的基本关系式。由式可见，在一定条件下，分析线对的黑度差与试样中该组分的含量c的对数成线性关系。 二.光谱定量分析方法—三标准试样法 此方法是最基本的定量分析方法，也是使用较广泛的一种方法。 由上述可知，?S∝