临床基因扩增检验实验室的设置质量管理.ppt

临床基因扩增检验实验室的设置、质量管理体系的建立及其技术验收 云南省临床检验中心 杜廷义 2007，12，20 题外话： 不参加实习课……？ 参加实习课……？ 对相关管理文件的理解： 临床基因扩增检验实验室管理暂行办法 临床基因扩增检验实验室基本设置标准（第六条） 临床基因扩增检验实验室工作规范（第十条、第十三条、第十四条） 临床实验室必须遵循的管理办法及其它行业标准 强调： 污染的控制：预防为主 质量保证 污染的途径： 实验材料 试剂每一成分 设备的每一部位 每一操作步骤 污染的判断： 经验： 全阳性，CT值35；标准品的CT值发生波动 阴性质控阳性 阳性率异常增高 轻微污染和非特异性扩增？ 污染和非特异性扩增: 目的基因 过程控制 反应体系（引物、模版、酶、镁离子、退火、循环） 条件优化 控制的手段： 工作区的严格划分 SOP的制订和严格执行 去污染措施的常规采用 污染的监测： 阴性质控的设置： 阴性血清样本 以水为模拟标本 仅含扩增反应液 （加鉴别实验室是否污染的空白管) 质控品的位置 标准品－空白－阳性质控－阴性质控－临床样本 标准品－空白－阳性质控－临床样本－阴性质控 实验室的设置 管理要求：设置标准和工作规范 具体落实：实事求是、因地制宜 设置标准和工作规范 “原则上分为四个分隔的工作区；…… 各区必须有明确的标记……” “每一区域都须有专用的仪器……；不同的工作区应使用不同颜色或有明显区别标志的工作服……；离开工作区时，不得将各区特定的工作服带出……” “……，可在开展临床标本检测前对提取方法进行评价” “……，本区如采用副压条件或减压情况下可减少扩增产物从本区扩散至前区的可能性。 理想的设置 现实的问题是： 建筑结构 通道、门 水电供应 采光、通风 基本的要求: 四个区域必须是相互独立的 各区的仪器设备及各种物品必须是专用的 各区间不能直通，应有缓冲间，供换工作服及鞋子用 产物分析区应安装排风扇或其它抽风装置。 实例： 实例： 实例： 实例： 实例： 小结： 处理原则的核心是通过合理的设置解决好临床PCR检测实际运作动态过程中可能发生的污染的预防问题 因此，实验室的设计必须充分考虑到对污染来源和污染途径的预防和控制 实验室各区的功能和配置： 试剂储存和准备区 储存试剂的制备 试剂的分装 主反应混合液的制备 冰箱 混匀器 微量加样器 可移动紫外灯 专用工作服和工作鞋 消耗品（带滤心吸头、离心管、一次性手套等） 专用办公用品等。 标本制备区： 临床标本的保存 核酸提取、储存及其加入至扩增反应管 测定RNA时cDNA的合成 不得在本区对样本进行PCR扩增 冰箱 (2~8℃和-20℃或-80℃) 高速台式冷冻离心机 水浴箱和/或加热模块 生物安全柜 混匀器 微量加样器 可移动紫外灯 专用工作服和工作鞋 专用消耗品 专用办公用品等 扩增区： DNA 或cDNA扩增 已制备的DNA模板和合成的cDNA的加入 主反应混合液制备成反应混合液 如果空间允许的话，模板的加入也可以在一个独立的空间内完成 核酸扩增仪 微量加样器(视情况定) 可移动紫外灯 专用工作服和工作鞋 专用消耗品 专用办公用品等 产物分析区： 扩增片段的测定 最主要的扩增产物污染来源 有可能使用致突变和有毒物质 微量加样器 可移动紫外灯 专用工作服和工作鞋 专用消耗品 专用办公用品等 辅助用房： 清洁区 标本接受区：灵活设置 不干扰四区 规范的保存和传递 实验室使用和管理： 区域的适当合并： “由于测定技术总是在发展之中，区域的合并应根据仪器的特点而定” 小结： 从核心仪器特点、实验室的现状出发，综合考虑管理要求 尽可能在现有条件下满足管理要求 以管理措施弥补硬件的不足 有条件，留有余地 再好的分区设置，如果不辅之与认真执行的相应的管理制度，等同于无。 实验室质量体系的建立： 管理要求 体系建立 管理要求： 1 实验室设置和设备 1.1 实验室原则上应分为四个区，但如使 用全自动扩增检测仪，区域可适当合 并。 1.2 各工作区的明确标记 1.3 实验室设置应能有效地防止PCR后区产 物的污染。 …… 管理要求： 2 设施和环境 2.1 实验室的设施、工作区域、能源、照明、 温控、通风等。应便于检测工作的正常进行。 2.2 实验室应配备温度湿度计、稳压电源等。 2.3 进入和使用实验室各区域应有明确的限制和 控制。 2.4 应有实验室清洁、