临床第次实验-mqf.ppt

第五次实验 实验目的 1、认识支原体集落、螺旋体形态 2、了解性病的防治方法 3、观察真菌形态、培养特性 1、检查牙垢中螺旋体（1份/人） 2、真菌检查法（1份/人） 3、观察梅毒螺旋体形态（示教） 4、观察支原体集落（示教） 5、HIV（录象） 实验内容 一、检查牙垢中螺旋体 螺旋体是一类细长、柔软、弯曲呈螺旋状，多数比细菌大，介于细菌与原虫之间，无鞭毛，但有轴丝（壁与膜之间），运动活泼的G-原核细胞型微生物，广泛分布于自然界与动物体，种类多，多为非致病性，仅少数对人致病，对人致病的有钩端螺旋体、回归热螺旋体和梅毒螺旋体等。 正常人口腔牙龈部寄居有奋森氏螺旋体，并与梭形杆菌共存，当机体抵抗力下降时（如病后），这两种菌大量繁殖，梭形杆菌协同奋森氏螺旋体可引起奋森咽峡炎、奋森氏口炎、牙龈炎和口腔坏疽等。 材料 牙签 、 生理盐水、玻片 染液 结晶紫、碘液、 95%酒精、 稀释石碳酸复红 方法 1．玻片一张，放生理盐水1-2环，用牙签取牙垢少许与生理盐水混合制成涂片 2．待涂片干后火焰固定, 革兰氏染色,镜检 牙垢螺旋体检查涂片制备 标本涂片---干燥---固定---结晶紫初染1分钟---水洗---碘液媒染1分钟---水洗---95%酒精脱色---水洗---稀释石碳酸复红染液复染30秒钟---水洗---自干或烘干、印干---镜检（油镜） 二、真菌检查法 真菌（fungux）是一大类具有细胞壁和典型细胞核不含叶绿素，不分根、茎、叶的真核细胞型微生物。 真菌的形态有单细胞和多细胞两大类，单细胞真菌呈圆形或卵圆形常见于酵母菌，类酵母菌以出芽方式繁殖。多细胞真菌大多长出菌丝与孢子，各种多细胞真菌的菌丝与孢子形态不同，菌落特征也不同，是鉴别真菌的重要标志。 真菌基本形态 单细胞真菌：白假丝酵母，卵圆形，革兰染色阳性，着色不一，可见假菌丝。 多细胞真菌：丝状菌或霉菌，有菌丝和孢子。 烟曲霉 白假丝 酵母 真菌的菌落 白假丝酵母：菌落圆形，较大，白色菌落底层有假菌丝 多细胞真菌：观察气生菌丝，营养菌丝，表面隆起，浅沟及菌落基底颜色。 白假丝酵母 (血平板) 黄曲霉 原理 直接涂片检查 用显微镜直接检查标本中有无菌丝及孢子的存在，对皮肤丝状菌的感染可作初步诊断，本法简单迅速易行。 材料 标本:脚皮等 试剂:10％KOH 其他:玻片、镊子、酒精灯等 方法 KOH透明法 （1）取脚皮少于玻片上，加二滴10%KOH溶液，覆盖一盖玻片，置火焰上微微加热，以加速角质溶解，使标本透明，然后微微加压，使成薄片，并需驱去气泡，用吸水纸吸去周围溢液，（如为毛发标本，切忌加热加压过甚，以保持毛发原形为宜，便于观察真菌与毛发的关系）显微镜检查。 （2）将已制备的标本片，先用低倍镜检查，然后再用高倍镜证实 注意：盖玻片倾斜45度慢慢盖上，不能产生气泡！ 标本片制备 真菌检查镜下观 报告：“找到菌丝或孢子”“找到发外孢子”“找到发内菌丝” 各种操作步骤 牙垢螺旋体检查:标本涂片---干燥---固定---结晶紫初染1分钟---水洗---碘液媒染1分钟---水洗---95%酒精脱色(淡紫色到无色)---水洗---稀释石碳酸复红染液复染30秒钟---水洗---自干或烘干、印干---镜检（油镜） 真菌检查法:（1）取脚皮少许于玻片上，加二滴10%KoH溶液，覆盖一盖玻片，置火焰上微微加热，以加速角质溶解，使标本透明，然后微微加压，使成薄片，并需驱去气泡，用吸水纸吸去周围溢液，（如为毛发标本，切忌加热加压过甚，以保持毛发原形为宜，便于观察真菌与毛发的关系）显微镜检查。 （2）将已制备的标本片，先用低倍镜检查，然后再用高倍镜证实 五、观察梅毒螺旋体形态 梅毒螺旋体：Fontana镀银染色，菌体非常细小，弯曲，螺旋状，呈棕褐色，有紧密螺旋。 六、支原体 支原体是一类没有细胞壁，呈多形性，能在无生命的培养基中生长繁殖的最小微生物。大小介于细菌和病毒之间。普通染色不易着色，用Giemsa染色着色较浅。革兰染色为阴性。营养要求较高，需要在含10～20%马血清和酵母浸液的培养基上生长。最适的pH7.8 ～ 8.0.生长缓慢,在固体培养基上培养2 ～ 3天后才出现菌落。典型的菌落呈“荷包蛋”状，中心厚边缘薄的菌落形态。菌落表面呈颗粒状 观察支原体集落 * 遵义医学院微生物教研室 * 遵义医学院微生物教研室 * 遵义医学院微生物教研室 * * 遵义医学院微生物教研室 * 遵义医学院微生物教研室 遵义医学院微生物教研室 * 遵义医学院微生物教研室 * 遵义医学院微生物教研室 * 遵义医学院微生物教研室 * * 遵