仪器分析(高效液相色谱分析).ppt

高效液相色谱分析 High Performance Liquid Chromatography,HPLC 内容提要 1 高效液相色谱法的特点 2 影响色谱峰扩展及色谱分离的因素 3 高效液相色谱法的主要类型及其分离原理 4 液相色谱法的固定相 5 液相色谱法流动相 6 高效液相色谱仪 7 高效液相色谱分离类型的选择 8 高效液相色谱法应用实例 9 液相制备色谱 10 毛细管电泳 采取措施： 1）液-液分配色谱：薄的固定相层；吸附、排阻、离子交换色谱：小的颗粒填料。 2）采用扩散系数大的液相固定相。 3）减小流动相的流速，改善传质。 Step 3: Detection? Sample particles pass through an optical cell? Sample particles interrupt laser beam and  scatter light? Photodiode detects the scattered light  §3.7高效液相色谱分离类型的选择90/ 考虑要点：试样性质（如分子量、溶解度、解离度等）、液相色谱特点及应用范围、实验条件。 1）低分子量，挥发性高的试样—用GC； 2）分子量200—2000的试样—标准LC 不溶于水：同系物用正或反相色谱；异构体多官能团用吸附色谱；分子大小差异用排阻色谱。 溶于水：不解离用反相色谱或排阻色谱（水为流动相）；可解离碱用阳离子交换色谱，酸用阴离子交换色谱；离子或反离子用反相离子色谱。 3）分子量大于2000—空间排阻色谱法(溶于水，水为流动相；不溶于水，非水流动相）。 色谱分离方法的选择:表3-3 §3.8高效液相色谱法应用实例 HPLC更适宜于分离、分析高沸点、热稳定性差、生理活性以及相对分子质量较大的物质； 因而已应用于核酸、肽类、内酯、稠环芳烃、高聚物、药物、人体代谢产物、生物大分子、表面活性剂、抗氧剂、杀虫剂、除莠剂等分析中； 在化工、环保、临床药物等领域广泛应用； 目前在生命科学中又显示出其突出地位. 具体认真观察、分析P91—97各图. §3.9 液相制备色谱97/ 1. 作用：制备色谱是以色谱技术来分离、制备较大量纯组分的有效方法。 2.实现液相制备色谱主要问题： a.色谱柱的柱容量 b.液相制备色谱方法 c.液相制备色谱仪 §3.10毛细管电泳 1.定义：在外加电场的影响下，带电的胶体粒子或离子在分散介质中作定向移动的现象称为电泳。 2.分类： a.毛细管区带电泳； b.毛细管凝胶电泳； c.胶束电动力学毛细管色谱； d.毛细管等电聚焦； e.毛细管等速电泳； f.毛细管电渗色谱. 本章作业：思考3,5，6,8题. 本次课学习结束. 本讲学习结束。 二、液-固吸附色谱法固定相 目前较常用5-10μm的硅胶微粒（全多孔型）. 三、离子交换色谱法固定相 1.薄膜型离子交换树脂，以薄壳玻珠为担体，表面涂1%离子交换树脂. 2.离子交换键合固定相：用化学反应将离子交换基团键合在惰性担体表面。 a.键合薄壳型：担体，薄壳玻珠； b.键合微粒担体型：担体，微粒硅胶. 四、排阻色谱法固定相 a.软质凝胶：葡萄糖凝胶；琼脂糖凝胶；(水流动相,常压) b.半硬质凝胶：交联聚苯乙烯凝胶；(有机溶剂，较高压) c.硬质凝胶：多孔硅胶；多孔玻珠；(高速) §3.5 液相色谱法流动相 1.重要性：GC载气仅三四种，要提高柱效选择性，主要是改变固定相的性质； LC则不同，当固定相选定时，流动相的种类，配比能显著地影响分离效果，因此流动相的选择很重要。 2.选择流动相应注意的因素79/2：5点， 选择流动相的注意因素： （1）流动相的纯度：一般是采用分析纯试剂，必要时需进一步纯化，以除去干扰的杂质。 （2）应避免使用会引起柱效损失或保留值特性变化的溶剂。（固定相不能吸附溶剂或与流动相互溶。） （3）对试样要有适宜的溶解度，否则会在柱头易产生沉淀。 （4）溶剂的粘度小些为好，否则会降低试样组分的扩散系数，造成传质速率缓慢，柱效下降。 （5）应柱检测器相匹配　（溶剂不能被相应的检测器检测出来） 3.溶剂的选择79/-3： a. 依据：溶剂的极性是重要依据。 b.溶剂极性顺序，水最大，煤油最小。 c.采用多元组合溶剂系统作为流动相（底液和洗脱液）（底剂决定基本的色谱分离情况；洗脱剂则调节试样组分的滞留并对几个具有选择性的分离作用） d.根据不同的方法选择合适的底液和洗脱液 选用溶剂的依据：溶剂的极性。 正相色谱：底剂（弱极性）＋洗脱剂（极性较强） 反相色谱：水（