微生物检查技术.ppt

中国药品生物制品鉴定所抗生素室 微生物检查技术【根据药品种类·给药途径分】 ：无菌检查法 ：细菌·霉菌及酵母菌计数检查法 ：药品中控制菌的检查 2014年7月7 赵忠麒 2005年4月16日星期六 中国药品生物制品鉴定所抗生素室 * 控制菌的检查 大肠杆菌的检查： 原理 仪器用具 试药与试液 检验程序： 供试液的制备 增菌培养 MUG试液原理 分离培养 生化试验 沙门菌的检查 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 一、大肠杆菌的生物学特性 1、简介 大肠埃希氏菌习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，大肠杆菌为人和动物肠道中的常居菌，一般多不致病，在一定条件下可引起肠道外感染。因此，大肠杆菌被列为粪便污染指示菌，是非规定灭菌口服药品的常规必检项目。 2、形态与染色 大小0.4～0.7×1～3um,无芽胞,大多数菌株有动力。 有普通菌毛与性菌毛，有些菌株有多糖类包膜，革兰氏阴性杆菌 2005年4月16日星期六 中国药品生物制品鉴定所抗生素室 * 1供试品的制备【大肠杆菌】 若为固体样品， 称取10g, 用100ml无菌生理盐水溶解， 充分混合溶解即为供试液 ， 若为液体样品， 量取10ml，加90ml无菌生理盐水溶解，充分混合溶解即为供试液。 2005年4月16日星期六 中国药品生物制品鉴定所抗生素室 * 2增菌培养 取供试液10ml接种于乳糖胆盐培养基中 ，置37℃培养18～24h，同时做好阴性和阳性对照， 阴性对照管加入与供试液等量的稀释液， 阳性对照管加入供试液以及50～100个阳性对照管， 培养乳糖胆盐增菌液 若供试增菌液澄清透明，证明无菌生长。 若供试液增菌液混浊，证明有菌生长。 37℃培养18～24h（必要时可延至48h）。阴性对照应无菌生长。摇匀上述BL增菌培养液 2005年4月16日星期六 中国药品生物制品鉴定所抗生素室 * 3 MUG试验原理 摇均上述乳糖胆盐增菌培养液，用灭菌吸管各吸取0.2ml,分别接种至5mlMUG培养基管内培养，分别在5h和4h， 阳性对照管应呈现萤光，MUG阳性 阴性对照管应呈现无萤光，MUG阴性 MUG阳性（有荧光）、靛基质阳性（玫瑰红色）,MUG阴性（无荧光）、靛基质阴性（无色） 2005年4月16日星期六 中国药品生物制品鉴定所抗生素室 * 4 生化试验： 乳糖发酵试液 甲基红试验 乙酰甲基甲醇生成试液  2005年4月16日星期六 中国药品生物制品鉴定所抗生素室 * 4.1 乳糖发酵试验 操作：取营养琼脂斜面培养物，接种于乳糖发酵管，培养24～48h，观察产酸（指示剂为酸性品红者为红色；指示剂为溴麝香草酚蓝者为黄色），产气（小倒管内有气泡，气泡无论大小） 假阴性的处理：为避免迟缓发酵乳糖产生假阴性，亦可接种5％乳糖发酵管。绝大多数迟缓发酵乳糖的细菌，可于24h出现阳性。或适当延长培养时间 2005年4月16日星期六 中国药品生物制品鉴定所抗生素室 * 4.2甲基红试验（Ｍ） 操作：取营养琼脂斜面培养物，接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，培养48±2h，于培养液中加入甲基红指示液2～3滴（约每ml培养液加指示液1滴），轻微摇动，立即观察 结果观察：呈鲜红色或桔红色为阳性，呈黄色为阴性。 2005年4月16日星期六 中国药品生物制品鉴定所抗生素室 * 4.3乙酰甲基甲醇生成试验（V-P） 操作：取营养琼脂斜面培养物，接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，培养48±2h，于2ml培养液中加入α-萘酚乙醇试液1ml，混匀，再加40％氢氧化钾试液0.