浙江大学课件(克隆与转化技术).pdf

载体类型、克隆转化与筛选技术 载体类型、克隆转化与筛选技术 质粒DNA 电泳分析 质粒DNA 电泳分析 感受态细胞制备、转化、克隆筛选 感受态细胞制备、转化、克隆筛选 浙江大学生物技术研究所 陈卫良 I. II.. 载体 I. II.. 载体 vector : 载体（vveeccttoorr）:: 把一个有用的目的 vector : 载体（vveeccttoorr）:: 把一个有用的目的 DNA片段通过重组DNA 技术，送进受 DNA片段通过重组DNA 技术，送进受 体细胞中去进行繁殖和表达的工具。 体细胞中去进行繁殖和表达的工具。 载体的基本类型 载体的基本类型 plasmid 质粒（ppllaassmmiidd）：最常见的载体   phage 噬菌体（ pphhaaggee） (Cosmid) 粘粒 ((CCoossmmiidd)) BAC (bacterial artificial chromosome) BBAACC ((bbaacctteerriiaall aarrttiiffiicciiaall cchhrroommoossoommee)) YAC (yeast artificial chromosome) YYAACC ((yyeeaasstt aarrttiiffiicciiaall cchhrroommoossoommee)) 其它 一、质粒载体 一、质粒载体 质粒载体的基本特性和要求 1) 分子量小、多拷贝、松弛控制型 2) 具有多种常用的限制性内切酶的单切点 3) 能插入较大的外源DNA片段 4) 具有容易操作的检测表型 1、pBR322 载体pBR322是由Bolivar 等人于 ppBBRR332222 BBoolliivvaarr 1977 , 4363bp 年构建的 长度为 。此 ,, bpp 载体中有两个标记基因，一个是氨 r 苄青霉素抗性基因（Amprr），另 AAmmpp r rr 一个是四环素抗性基因(Tet ). ((TTeett )).. 7种限制酶(EcoRV、NheI、 77 ((EEccooRRVV NNhheeII BamHI、SphI、SalI、XmaIII和 BBaammHHII SSpphhII SSaallII XXmmaaIIIIII NruI)的识别位点位于四环素抗性基 NNrruuII)) 因内部. 2 种限制酶(ClaI和HindIII) .. 22 ((C