14-3-3tau蛋白对滋养细胞生物学行为影响分析.pdf

中文摘要 中文摘要 滋养细胞功能异常导致病理妊娠的分子机制一直被广泛研究，我们课题组在 以前的研究中已运用蛋白质组学技术分别对缺氧培养的滋养细胞和子痫前期胎 盘的蛋白质表达谱进行了研究，发现一种名为14．3．3tau的蛋白质的差异表达， 这引起了我们很大的兴趣。在此基础上，本研究进一步从14．3．3tau在胎盘滋养 细胞中的定位入手，再通过RNA干扰和表达质粒转染的方法下调和上调滋养细 胞内14．3．3tau的表达研究其对滋养细胞增殖、分化能力的影响，并通过蛋白质 组学和生物信息学的方法从整体角度分析14．3．3tau在滋养细胞所起的作用。此 外对滋养细胞外的14．3．3tau的功能我们也进行了探讨。旨在通过本课题对14．3．3 tau在滋养细胞中所扮演的角色做出较全面的解释。 第一部分14．3-3tau与滋养细胞的增殖和分化 14．3-3 第一节 tau在胎盘滋养细胞中的定位 tau在胎盘组织中的定位和滋养细胞体外分化模型中 目的通过分析14．3．3 tau可能的作用。 的表达变化情况，了解滋养细胞中14．3．3 方法用免疫组化方法检测人早孕期绒毛，中孕期胎盘、足月妊娠胎盘及子 痫前期胎盘中14．3．3 合体化，免疫细胞化学检测BeWo细胞中14．3．3tau的定位变化，RT-PCR和 Western Blot法检测14．3．3tau转录水平和蛋白水平的变化。 结果1)在各孕期的胎盘绒毛中，14．3．3tau主要在绒毛内细胞滋养细胞表 达，而合体滋养细胞未见其表达，并且随着孕周增加绒毛内细胞滋养数目减少， tau 14．3．3tau的表达也逐渐减少。2)在早孕期侵袭绒毛和蜕膜组织中，14．3．3 在固定绒毛的绒毛外滋养细胞(EvT)胞浆表达，而在侵入蜕膜的EVT胞膜表 达。3)病理胎盘中，子痫前期胎盘与正常足月胎盘相比呈明显的缺氧应激改变， tau 14．3．3tau表达也增加。4)与对照组相比，14．3．3mRNA和蛋白表达在 tau呈阴性。 细胞合体化后14．3．3 讨论 14．3．3 mu在不同类型胎盘滋养细胞中的定位提示其与滋养细胞增 殖、合体化和侵袭功能相关，并可能参与子痫前期病理过程中胎盘滋养细胞对缺 氧的应激调节。 中文摘要 第二节 调节14．3．3tau的表达对BeWb细胞增殖和分化的影响 目的妊娠过程中，细胞滋养细胞不断增殖，并通过两种途径分化，分别形 成合体滋养细胞或侵袭型滋养细胞，前期研究显示14．3．3tau在这三类细胞的表 达水平不同，但其发挥的作用尚不清楚，故本研究意在探讨14．3．3tau是否参与 滋养细胞增殖、合体化和侵袭能力的调控。 方法RNA干扰方法下调人绒癌滋养细胞株BeWo细胞内14．3．3tau的表 达，构建14—3·3 tau表达质粒上调BeWo细胞内14．3．3tau的表达。RT．PCR和 Western 胞DNA合成能力，流式细胞仪检测BeWo细胞周期变化。ELISA方法检测滋养 性阻断ERK信号通路观察BeWo细胞侵袭和合体化能力的变化。 结果1)RNA干扰72h，BeWo细胞14．3．3 tau表达被显著被下调；转染 14．3．3 tau表达质粒24h，BeWo细胞显著表达14．3．3tau融合蛋白，提示14．3．3 tau表达被上调。2)下调14．3．3tau后BeWo细胞PCNA的转录和蛋白表达减 少，而上调14．3．3 tau后PCNA的转录和蛋白表达增加，提示14．3．3tau促进滋 (P0．05)，而上调1