21羟化酶基因外显子1多态性与启动子区突变的分析.pdf

＼ 21羟化酶基因外显子1多态性和启动子区突变研究 中文详细摘要 流天性肾上腺皮质增生症(CAH)是一种较常见的遗传代谢性疾病，90～95％ 是由21羟化酶缺陷所致，临床表现与21羟化酶的缺乏程度有关，分为三种亚型： ①失盐型，②单纯男性化型，以上二者属于经典型；③隐匿迟发型，又称非经典 型。21羟化酶由CYP21基因编码，该基因突变可引起CAH，既往有关该基因突 变的研究主要集中在编码区，对启动子区的突变研究较少。启动子区突变可能通 过改变调节因子结合位点或其它途径导致启动子功能的改变，进而影响2l羟化 酶的活性。)本研究检测了CYP21基因外显子1多态性和启动子区突变，从分子 遗传学角度深入探讨21羟化酶缺乏症的发病机制。 f研究方法：研究对象分为CAH病例组及正常对照组，抽取静脉血，从白细 胞中抽提基因组DNA，首先设计特异性引物通过PCR扩增CYP21基因片段， I限制性内切酶鉴别扩增片段。然后用巢式PCR扩增含外显子1的DNA 并用Kpn 片段，用小量柱离心式PCR产物回收试剂盒制备测序模板，用双向DNA测序、非 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法研究CYP21基因外显子1多态性。分别用巢式 序列变异采用DNA测序和PCR-SSCP等方法。 27位存在两种等 了其在中国人群中的等位基因频率。DNA测序证实在外显子1 型的频率分别为77．8％、22．2％，正常人则为83％、17％，两组人群中基因型与等 位基因频率无显著统计学差异。CAH患者中，失盐型与非失盐型等位基因频率I 型和II型分别为91．7％、8．3％及66．7％、33．3％，两组中基因频率分布有统计学差 碱基变异，即外显子1第45位编码子CCA—CCC改变，但上述两个编码子均编码 脯氨酸，故CYP2l基因外显子1第135bp存在A／C多态性改变，目前相关文献尚 未见该多态性的报道，其在CAH组和对照组的等位基因频率有待进一步研究。③ CAH患者组及对照组(50例中国人，6例欧洲人)所有样本的CYP21基因启动 前已建议Genebank序列提交中心将之修正为启动予区相应位点的正常序列。④ 明其为多态性改变。统计资料表明，--532bpC／T等位基因频率分布在CAH不同 子，其在正常人群中等位基因频率在研究中。⑤检测启动子～1058bp～一739bp 区突变．一例CAH样本PCR扩增产物出现SSCP异常条带，测序发现该样本存 在--878G／A杂合子变异、--877T—A纯合子变异。厂一百一～ 一种新突变，其对2l羟化酶功能的影响在研究中。 ， f基因多态性是目前的研究热点之～，在基础研究和临床中的应用越来越广 泛。CYP21基因外显子l 酸多态性与CAll及其l}缶床分型的相关性研究完善之后，上述多态性可作为遗传标 和启动子区域突变特点并对突变启动子功能进一步研究，将可能从分子遗传学水 平阐明先天性肾上腺皮质增生症的发病机理，对CAH的病因、诊断及基因治疗均 有重要意义。}一勺一一 ， 关键词先天性肾上腺皮质增生症 C、P21基因启动子 多态性 突变PCRSSCPDNA测序 Exon1andMutationsinPromoter of in Region Polymorphism Study of Gene 21-hydroxylase Abstra