流式细胞术应用于铜绿假单胞菌体外药敏实验分析.pdf

流式细胞术应用于铜绿假单胞菌体外药敏实验的研究 中文摘要 流式细胞术应用于铜绿假单胞菌体外药敏实验的研究 中文摘要 目的：传统的抗生素敏感试验包括：稀释法(肉汤稀释法和琼脂稀释法)、纸片 扩散法和E一试验，均需要将细菌在药物作用下培养过夜才能观察结果，相当费时费 力。目前多采用比浊法目测结果，提供的结果代表细菌生长的均数，对亚菌群的敏 感性无法判断。流式细胞仪可同时、快速、多参数地分析单个细胞的生物学特性， 医院感染的三大病原菌之一，探索一种快速检测此类细菌及其药物敏感性的方法， 对于重症感染性疾病的快速诊断和治疗，预防和治疗医院感染，减少多重耐药菌株 的产生与传播，减少患者和医院的负担有重要的经济效益与社会效益。 本试验选择能够通过破损的细胞膜进入细胞并与核酸相结合的荧光染料碘化丙 啶(PD，使其着染于经过抗生素处理后的细菌，用流式细胞仪检测细菌荧光信息的 inhibitory 变化，推断细菌对抗生素的敏感性和药物的最低抑菌浓度(Minimal antibiotic test，FCST)的 荧光术抗生素敏感试验(Flowcytofluorometricsusceptibility 优缺点，为该方法在临床上的应用积累实验依据。 方法：我们收集了2003—2004年苏州大学附属儿童医院外科及重症监护病房医院 感染患儿的临床标本中分离出的铜绿假单胞菌共22株，并购买了质控标准菌株 料PI 细菌。根据荧光信息的变化判断细菌对药物的敏感性。随着药物浓度的增加，如果 碘化丙啶荧光阳性百分率(PI％)或平均荧光强度(MFI)均在狭窄范围内，无明显 上升，判断为菌株耐药；若PI％逐渐增至75％或以上，则此时的最低药物浓度为MIC， I 藏或缨懿=彀馥罐子锅缘程尊照藏体终嚣敏实验醵翠}究 串文接受 表示缨麓瓣药褥敏惑{躐MFI突然瑶燕l50％袋戳主，粼接鞭忿鞋戆簸糕莪秘浓菠为 M戤，虽缨萤载感。 committeeforelinieal 缩暴：根掇NCCLS(National Standard)规定， Laboratory 臻辩法梭涮结慕宪垒一致。 对予编号为19和22驹二掾锻绿镁攀擞鼙，流式掘脆搜梭测发聪，醚羞药物浓 度的爝搬PI％黧然寄上丹，德各个PI％值均在50。4璐下，同时M鞲亦嚣蹭显增加， 增加幅度不超过40％。我们判断19号和22号菌株黜亚胺培南耐药。对于其余20株 缀壤，隧蕾嚣骢浓度瓣增攘Pt％穗逡激媾龆楚75％戢鞋上，或MFI增粕辐虞超遘50％。 我翻将p燃逐瀵璞热至於％蔽鞋上，或者MFI灌籍怒进50％或戳上熬鼹{磊芬躲涟褒 粼定为驻胺培南魏M站，鼠藩掾澍蓊物敏感。 将试管稀精法和FCST梭测静MIc相比较，以pI，75％或以一t为判断标准时， 鞭标准辩，有16拣检测约结鬃糖鞠(72，7％)，翁5撩蟪测结果糟麓1个稀释寝 (22．7％)，有l栋梭测结慕裰差2十稀释魔(4。6％)。稻薏1个稀释度西雩二静方法 一数性为95。4％，相差2个稀释魔时～致憷为100％。迸明我们的研究方法是可行的。 瓣论；t)本磷突成功建立了镊缭骰荦熙蘩静滚式缀腿荧光零麓秘敏熬实骚 (FCST)熬其体操{警穷法；2≥FCST与斌簿穗强法穗晓较，蕊魏敏感瑟祭完垒～竣， FCST方法较传统方法疑为简攀、快速、准确、客满；3)磺亿褥踺荧光阳性疆分零 (pI％)和平均荧光强度(MFI)均可用采准确捺麟挽生素的MIC。 关键谲：滤式继臆术(FeM)；醭纯丙豫阳性酉静率(P1％)；平均菠巍强度(MFl)； 溅式缀您荧必末撬生索敏感试验(FCST)；铡蛭瑕攀藏菌(PA) 体 誊：攀露颁