姜黄素对H202损伤HK-2细胞修改.pptVIP

姜黄素对H202损伤的HK-2细胞的保护作用 导 师 纪玉莲 硕 士 洪汉利 研究背景 急性肾功能衰竭是临床常见的综合征,其死亡率一直居高不下。 各种病因导致的ARF均有肾小管上皮细胞,包括近端小管(HK-2细胞)等受到严重受损或死亡的显著特点 。 A 越来越多的资料表明,肾小管上皮细胞过度凋亡在ARF的发病机制中起了重要作用。 研究背景 近年来的研究证明，在肾缺血或中毒性ARF中,细胞凋亡明显增加。 肾缺血与缺血后再灌注均可使氧自由基与活性氧增多,大量氧自由基生成又是造成缺血再灌注损伤的重要介质。 研究背景 各种氧化剂 (如过氧化氢)可以直接诱导细胞凋亡。 a 抑制aSOD的活性也可以诱导细胞凋亡。 a 使用抗氧化剂(如:Vit E 等)可以阻断氧化应激诱导的细胞凋亡。 研究背景 姜黄素(Curcumin,Cur)是从姜黄中提取的酚性色素,为姜黄的主要有效成分,体内外实验证明它具有抗氧化作用。 A Rajakrishnan等发现Cur 可通过抗氧化作用而对乙醇诱导的脑细胞损伤具有神经保护作用。A A Cur 可否通过抗氧化作用而对H2O2诱导的HK-2细胞损伤具有保护作用尚未见报导。 Sujata MK ,et al Biophys Chem,1999;80(2) Rajakrishnan V,et al;Phytother Res,1999 研究目的 探讨姜黄素对H2O2诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响 研究内容 探讨H2O2诱导HK-2细胞凋亡的诱导作用。 姜黄素对HK-2细胞凋亡的保护作用 实验方法:不同浓度H2O2与HK-2细胞共同培养,观察凋亡率 预期结果 H2O2有诱导HK-2细胞凋亡的作用,并且呈剂量依赖关系。 第二部分姜黄素对H2O2损伤的HK-2细胞的保护作用 实验方法:以H2O2损伤HK-2 细胞为模型研究姜黄素对HK-2细胞的保护作用 预期结果 姜黄素对H2O2诱导凋亡的HK-2细胞有保护作用 可行性分析 * * 第一部分 H2O2对HK-2细胞的凋亡诱导作用 H2O2 20umol/L 100umol/L 200umol/L 400umol/L 1.电镜观察细胞形态学变化. 2.MTT(甲氮甲唑蓝)法检测细胞增殖状况 3.碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡. 4.罗丹明123(RH123)染色FCM检测细胞线粒体膜电位. 5.DHR染色FCM检测细胞内活性氧(ROS)的含量. 6.荧光测定免疫吸附法(FIENT)测定Caspase3活性. 技术路线 空白对照 姜黄素与HK-2 细胞培养组 姜黄素与模型组 20umol/L组 100Umol/L组 40umol/L组 100umol/L H2O2组 200umol/LH2O2 20umol/L组 100umol/L组 40umol/L组 20umol/L组 100umol/L组 40umol/L组 400umol/lH2O2 20Umol/L组 100umol/L 40umol/L 检测指标:1.电镜观察细胞形态学变化 2.测定Caspase活性3.检测细胞线粒体 膜电位4.测定细胞内ROS.5.检测Bcl-2表 达6.观察细胞凋亡程度