新型复合酶在肉鸡饲料中的应用.doc

新型复合酶在肉鸡饲料中的应用 ????作者主要报道了实验室自行发酵的FAE及商品饲料酶一溢多酶(主要含木聚糖酶(25000 U/g)、纤维素酶(800 U/g)、甘露聚糖酶（2000 U/g）、B一葡聚糖酶(30000 U/g)、α一淀粉酶(300000 U/g))酶解 解麦糟的工艺，及将酶解后的麦糟添加于饲料中饲喂肉鸡的实验结果。 1.材料与方法 1.1材料 1.1.1??主要试剂??反式阿魏酸标准品：Sigma公司产品；阿魏酸甲酯：华侨大学曾庆友老师自行合成：低聚木糖标准品、木二糖标准品：日本和光纯药工业株式会社产品；葡萄糖标准品：上海国药化学试剂有限公司产品；溢多酶AF831:广州溢多利公司产品；玉米及豆粕：厦门市振裕饲料有限公司产品：预混料：厦门百惠行科技有限公司产品；麦糟：厦门青岛啤酒厂产品。 1.1.2仪器??Agilent 1100高效液相色谱仪：美国安捷伦公司产品；HPX-42A柱：美国Bio-Rad公司产品；ODS-C 18色谱柱：美国Thermo公司产品：SP-2102UV紫外可见分光光度计：L海光谱仪器有限公司产品；超滤膜包Viva.flow 200:北京赛多利斯仪器有限公司产品。 1.1.3??菌种黑曲霉：作者所在实验室筛选保藏。 1.1.4鸡苗??青脚麻鸡：厦门五显镇三秀种禽厂提供。 1.2培养基及其培养条件 1.2.1??种子培养基PDA培养基，36℃培养2d。1.2.2发酵培养基将麦糟烘干过65目筛，按m（麦糟）：m（麦麸）=4：1的比例，每个搪瓷盘中加入麦糟和麦麸的混合物509及75 mL营养盐溶液，混匀，121℃灭菌30 min。每个搪瓷盘中接种12.5ml菌液，33℃培养6d。 ????营养盐溶液：蛋白胨29，酵母粉49，NaH2P042H201.52 g,KH2P04 l g,CaC120.3 g,MgS04.7H200.3 g,Na2HP04 12Hz031.4 g,Na2HP04 2H2015.6g，用蒸馏水定容至IL。 1.2.3??FAE粗酶液制备 ????1)发酵培养基抽提将发酵液加入1000 mL蒸馏水，置于33℃．180 gmin的摇床中振荡2.5 h．取出静置，用8层纱布过滤。 ????2)发酵液浓缩在超滤膜相对分子质量为30000，进口压力为0.1 MPa，进料速度为200 mL/min,20℃操作条件下，超滤浓缩，浓缩后的FAE酶活达到20 U/mL以上。 以上。 1.3??各种物质测定方法 1.3.1??FA测定??按文献方法分析I131。 1.3.2?XOS测定??按文献方法分析I13I。 1.3.3??还原糖测定??采用DNS法114l。 1.4复合酶酶解麦糟工艺研究 1.4.1??FAE添加量对麦糟酶解效果的影响??称取5g含水量70%的麦糟置于50 mL三角瓶中，固定溢多酶的添加量为质量分数0.012%，分别以0、11、22、33、44、55 U添加浓缩后的粗酶液，50℃，酶解24 h。酶解后，往每个锥形瓶中加入20 mL的蒸馏水，40℃，浸提2.5 h后，4℃，10000 r/min，离心20min。取上清液测定FA、XOS、还原糖含量。 1.4.2??不同温度对麦糟酶解效果的影响??添加FAE 8.8 U/g麦糟，控制酶解温度为20、30、40、50、600C，其他操作同1.4.1。 1.4.3??不同酶解时间对麦糟酶解效果的影响??酶解温度为40℃，控制酶解时间为0、0.5、1、1.5、2、2.5、3d，其他操作同1.4.2。 1.4.4不同含水量对麦糟酶解效果的影响??酶解时问为2.5 d，调节麦糟含水量为30、40、50、60、70%，其他操作同1.4.3。 1.4.5??不同的酶解方式对麦糟酶解效果的影响麦糟含水量为50%，按(1)一(5)组添加各酶液，其他操作同1.4.4。 (1)不加任何酶液，放置60 h；(2)往麦糟中添加溢多酶0.006%，酶解24 h后，添加溢多酶0.006%（g/g麦糟），再酶解36 h；(3)往麦糟中添加FAE 4.4 U/g麦糟，酶解24 h后，添加FAE 4.4 U/g麦糟，再酶解36 h；(4)往麦糟中添加FAE 8.8 U/g麦糟及溢多酶0.012%（g/g麦糟），酶解60 h;(5)往麦糟中添加0.006%溢多酶，酶解12h后，添加FAE4.4 U/g麦糟，酶解12h后；加入溢多酶0.006%，酶解12h后，最后加入FAE 4.4 U/g麦糟，酶解24 h。 1.5复合酶对肉鸡生产性能的影晌 1.5.1??麦糟的处理及饲料配方 ????1)麦糟的处理各组麦糟分别按如下处理：I组，每克含水量50%的麦糟加入0.3 mL蒸馏水：Ⅱ组，每克含水量50%的麦糟加入0.3 mL蒸馏水及溢多酶0.012%；Ⅲ组，每克含水