丁香酚胚胎毒性评价：应用胚胎干细胞的实验模型.pdf

中国组织工程研究 第 19誊 笫 19力 2015—05一O7出版 ChineseJournalofTissueEngmeeringReseamh May 2015 VoL19,No．19 WWW．CRTER．org 丁香酚胚胎毒性评价：应用胚胎干细胞的实验模型 李付贵，陈 京，程伟民，季明芳(中山大学附属中山医院肿瘤研究所，广东省中山市 528403) 文章亮点： 需要大量动物进行实验的体 内胚胎毒性实验 已经逐步被各国禁止，因而有必要探索新的胚胎毒性实验方法。 李付贵，男，1984年生， 实验首次采用经欧洲替代实验验证中心验证的胚胎干细胞实验模型方法对丁香酚的胚胎毒性进行预测，证明 安徽省阜阳市人，回族 ， 丁香酚为强胚胎毒性化合物，为进一步评价丁香酚的安全性提供了研究数据，且这种方法与动物实验相 比， 2012年中山大学毕业，博 士，主要从事干细胞增殖 具有简便、经济、实验周期短、实验条件可控等优点。 分化机制研究 关键词： 于缅匏：疆验干缅匏：T香酚： 眙发育：胚治于细胞实验模型：疆眙毒性：毒理学：心飘缅瞻：国家 自然 中图分类号：R3942 秘学基金 文献标识码：A 主题词： 文章编号：2095-4344 f2015)19—03017-05 T香酚：毒性试验 半数掷裁浓瘦：骚眙于细跑 稿件接受：2015-04．07 基金资助 ： http：IW／~ N．crter．org 萤家 自然科学基金青年基金硬g黾【 Q ；中国博士后科学基金2【014M562244)：广东雀 自然科学基金 (2014A030310013J 摘要 背景：丁香酚在医学及食 品领域的应用越来越广泛，其药理学作用也不断被研究和发现。但是，对其毒性的 研究尚末建立完整 的数据库，特别是发育毒性及致畸性的安全性评价亟需完善。 目的：建立胚胎干细胞实验模型的基础上，应用胚胎干细胞实验模型初步评价丁香酚的胚胎毒性。 方法：体外培养小鼠成纤维细胞 3T3和小鼠胚胎干细胞E14TG2a，MTT法检测阳性对照5一氟尿嘧啶、阴性对 照青霉素G和受试物丁香酚对3T3细胞和E14TG2a细胞的细胞毒性，计算3种化合物对 E14TG2a细胞和3T3 细胞的半数生长抑制浓度值；采用悬滴一悬浮 贴壁法体外诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化，根据浓度一反应曲线计 算3种化合物对 E14TG2a细胞的半数分化抑制浓度值。利用胚胎毒性预测模型预测丁香酚的胚胎毒性。 结果与结论：丁香酚对 3T3细胞和 E14TG2a细胞的增殖均有抑制作用，其半数生长抑制浓度值分别为 (3．613+0．192)和(1．799~0．131)mg／L。丁香酚对 E14TG2a细胞的心肌分化亦有抑制作用，其半数分化抑制浓 度值