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第 24卷 第 5期 病 毒 学 报 VoI_24 No．5 2008年 9 月 CHINESE J0URNALOFVIROLOGY September 2008 中国猕猴预存抗腺病毒中和抗体滴度对腺病毒体外感染 单核细胞效率的影响 庄秋传 。，孙彩军 ～，李锋 ～，冯立强。～，刘宜楚。，陈凌。 (1．中国科学院 华南植物园，广东 广州 510650；2．中国科学院 广州生物医药与健康研究院，广东 广州 510663； 3．中国科学院 研究生院，北京 100049) 摘要 ：为 了探索通过血液系统利用重组腺病毒载体 的方法 ，以中国猕猴为动物模型，以复制缺陷型人 5型腺病毒 (humanadenovirusserotype5，HAd5)为载体携带报告基 因在体外直接感染外周血单个核细胞 (peripheralblood mononuclearcells，PBMC)。首先对 HAd5在体外感染 PBMC的条件进行优化 ，证实离心力可提高 HAd5的感染 效率 ；细胞分群结果表明HAd5特异感染PBMC中的 CD14 单核细胞 ，仅感染小部分 自然杀伤细胞 ，但几乎不感 染 T淋 巴细胞和B淋巴细胞。首次发现 ：猕猴体内预先存在的抗 HAd5中和抗体滴度越高，其单核细胞在体外对 HAd5的易感性越强 。这种现象将拓宽基于腺病毒载体的基因治疗和疫苗的临床应用范围，尤其是对预先存在腺 病毒 中和抗体 的人群更具意义，为探索更方便有效的基因治疗和疫苗研究带来新 的思考 。 关键词 ：单核细胞 ；腺病毒 ；中和抗体 ；体外感染 ；离心 中图分类号 ：R373 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—8721(2008)05—0383—07 自1993年腺病毒作为病毒载体首次应用于临 基于细胞的免疫治疗在基因治疗特别是癌症治 床基因治疗以来 ，以HAd5为主的腺病毒载体广泛 疗等领域备受关注。树 突状细胞 (dendriticcell， 应用于基因治疗与疫苗开发 。目前全球范围内以腺 DC)作为抗原提呈细胞可引发特异性细胞免疫 ，通 病毒作为载体治疗癌症、传染性疾病等的临床实验 过重组腺病毒携带抗原基因表达可诱导细胞免疫杀 为 342例，在各类载体中占首位 (24．8 )[17。腺病 伤病源或肿瘤 ，但 DC体外培养分化操作比较繁琐 ， 毒作为载体有以下优点：①携带的基因可高效转运 且成本很高 ]。近年来 ，基于单核细胞的免疫治疗 到细胞核中；②细胞嗜性广泛 ，可感染多种类型的增 逐渐兴起[5]。但这两类细胞 CAR受体和整合素受 殖和静止细胞；③生产工艺简便 ，并且产毒滴度高 ； 体表达水平极低 ，必须通过提高这些受体的表达水 ④不整合到宿主基因组 中。但是 ，腺病毒载体的主 平才能提高单核细胞及 DC感染 HAd5的效率 ]。 要缺点是 ，在人群中普遍存在针对载体 自身的中和 已有研究表 明利用离心力可提高 HAd5对人单核 抗体，不利于重复使用 [。 细胞或人单核细胞来源 DC的感染效率 ]。 HAd5利用不 同的途径感染不 同类型的细胞 ， 本研究在体外以HAd5一EGFP(enhancedgreen 经典的途径是通过宿主细胞表面的柯萨奇病毒和腺 fluorescenceprotein，EGFP，增强型绿色荧光蛋白) 病毒受体 (coxsackievirusandadenovirusreceptor， 直接感染新鲜分离 中国猕猴 PBMC，对感染方法进 cAR)介导的黏附作用 (attachment)和整合素 (inte— 行优化 ；通过流式细胞仪分析 HAd5一EGFP感染 grin)介导的内化 (internalization)；在缺乏这些受体 PBMC中各类细胞群的比例