人成熟型转化生长因子-β1融合蛋白的纯化及其多克隆抗体的制备与初步临床应用.pdf

维普资讯 · 372 · 中国感染控制杂志2007年 11月第 6卷第6期 ChinJInfectControlVol6No6Nov2007 ． 论 著 ． 人成熟型转化生长因子一3』融合蛋 白的纯化及 其多克隆抗体的制备与初步临床应用 龚环宇 ，胡国龄 ，谭德明 ，侯 珏 (1中南大学湘雅三医院，湖南 长沙 41()013；2中南大学湘雅医院，湖南 长沙 410008；3中南大学湘雅医学院，湖南 长沙 410013) [摘 要] 目的 获得兔抗人成熟型转化生长因子一 (TGF_融)多克隆抗体，并将其初步应用于临床检测。方法 将人成熟型TGF-~融合蛋白经亲和层析法纯化，并将其作为抗原免疫家兔，获得兔抗血清，经饱和硫酸铵纯化， 获得初步纯化的兔抗人TGF一融多克隆抗体。采用双抗夹心问接酶联免疫吸附试验 (EIISA)测定健康对照者、慢 性肝病及肝硬化患者血清TGF-~ 的OD值。结果 获得初步纯化的兔抗人TGF-~特异性多克隆抗体，该抗体能 与人TGF3I起反应。各组血清TGF-~ 的检测 ())【4值为：轻、中度慢性肝炎组 11．333±6．136，慢性重症肝炎组 16．400±6．959，肝硬化组 14．975±6．090，健康对照组7．275±3．222；前三组分别与健康对照组 比较，差异均有显 著性(P()．()1)；慢性重症肝炎组、肝硬化组分别与轻、中度慢性肝炎组比较，差异亦有显著性(P0．01)。结论 制备的TGF ．多克隆抗体可初步用于临床检测，判断肝纤维化程度。 [关 键 词] 人成熟型转化生长因子一p1；融合蛋白；亲和层析法 ；多克隆抗体；肝纤维化；实验室技术与方法 [中图分类号] R446．61 [文献标识码] A [文章编号] 167l一9638(2007)06～0372—05 PurificationofhumanTGF-~1fusionproteinandclinicaldetectionofTGF- 1 byitspolyclonalantibody G()NGHuan— “，HUGuo—ling ，丁、ANDe—uring ，H0UJue (1．TkeTkirdXiangyaHospi— tal，CentralSouthUniversity， ang．a410013， ina；2．XiangyaHospital，CentralSouthU- niversity， angsha410008，C ina；3XiangyaSchoolofMedicine，CentralSouthUniversity， Changsha410013，china) [Abstract] Objective Toobtainthefusionproteinoftransforminggrowthfactorbeta1(TGF-p】)andtherabbit anti-humanTGF-~1polyclonalantibody，andtodetecttheseruminpatientsbythispolyclonalantibody．Methods Thefusionproteinwaspurified byaffinitychromatography，tworabbitswereimmunizedwiththepurifiedfusion protein，andtheimmuneseraofrabbitswerecollected．Antibodiesobtainedfrom theimmuneserawerepurifiedby saturatedammonium sulfate，andtheindirectsandwichenzymeimmunoassaywasusedtodetecttheOD valuesof TGF-~1inseraofhealthycontrolandpatientswithchron