人细胞角蛋白19片段单克隆抗体的制备和鉴定.pdf

中国医药生物技术 2012年 l2月第7卷第6期 ChinMedBiotechnol，December2012，Vo1．7，No．6 DOI：10．3969／cmba．j．issn．1673-713X2012．06．005 · 论 著 · 人细胞角蛋白19片段单克隆抗体的制备 和鉴定 刘红，刘宾，李瑞娟，杨萌萌，李鹏聪，张鑫，孙旭东，杨铁生 【摘要】 头颈鳞细胞癌、口腔鳞状上皮细胞癌等鳞细胞癌 目的 制备人细胞角蛋白 19片段 (CYFRA21．1)的单克 中，或者乳腺癌、肝癌、肺癌和胰腺内分泌肿瘤等 隆抗体 (mAb)，并对其免疫特性进行鉴定。 转移癌类 中都会高表达_5J，具有很好的血清诊断学 方法 用重组 CYFRA21-1蛋白免疫 BALBc／小鼠，取血 价值，已被作为肿瘤细胞在血液和骨髓中循环的标 清效价最高小鼠的脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞 SP2／0融 志物，同时也是预后诊断的重要标志物u ¨J。目前， 合，筛选出阳性杂交瘤细胞株，进行亚克隆，并鉴定分泌抗 临床上应用的人血清 CYFRA21—1免疫检测试剂盒 体亚型；制备小鼠腹水 ，用 proteinG 从腹水 中纯化 出 中的抗体主要为进 口产品，而具有高结合能力的特 CYFRA21—1的 mAb；用间接 ELISA测定 mAb的效价， 异抗体的制备是免疫检测方法成功建立的关键u引， Westernblot和竞争 ELISA 对 mAb的免疫特性进行检 也是影响检测成本的重要因素。因此，CYFRA21．1 测，竞争 ELISA对 mAb的临床应用性进行评价。 特异 mAb单克隆抗体的制备，对免疫检测方法的 结果 获得 2G8和 12G7两株能稳定分泌人 CYFRA21．1 建立和检测成本的控制具有重要的意义。 mAb的杂交瘤细胞株，其分泌抗体都为轻链为 的 IgG1； 两株 mAb都能特异识别人血清中的 CYFRA21．1，效价分 1 材料与方法 别为 1×10 和 5×10。。；检测 134份血清样本 CYFRA21．1 1．1 材料 含量的结果与北京源德生物医学工程有限公司 CYFRA21—1 1．1．1 血清样本 血清样本共计 134份，其中男 化学发光法定量检测试剂盒检测结果的相关性分别为 Y= 性 74份，女性 60份，年龄在 20～92岁，全部 O．8167X+0．3755(r=0．9772)和 Y=O．8142X+0．3655(r= 为本院门诊及住院患者样本。 0．9770)。 1．1．2 实验动物 6周龄，雌性 BALB／c小 鼠购 自北京维通利华实验动物技术有限公司。 结论 成功制备两株人 CYFRA21-1的特异 mAb，为后期 1．1．3 主要试剂和仪器 CYFRA21—1化学发光 人血清 CYFRA21．1定量测定试剂盒的完全国产化奠定 了 法定量检测试剂盒为北京源德生物医学工程有限 良好的基础。 公司产品；CYFRA21．1重组蛋 白购于德国 Progen 【关键词】 角蛋白l9； 抗体，单克隆； 肿瘤标记， 公司；碱性磷酸酶标记的山羊抗 鼠和辣根过氧物酶 生物学； CYFRA21-1 标记的山羊抗 鼠 IgG购 自北京鼎国昌盛生物技术 中国医药生物技术 2012’6《1：430．435 有限公司；BCIPN／BT底物显色试剂盒、可溶性单 组分 TM