从人源天然ScFv噬菌体抗体库中筛选A型肉毒毒素特异性抗体.pdf

毛晓燕等 从人源天然scFv噬菌体抗体库中筛选 A型肉毒毒素特异：睦抗体 第 l2 doi：10．3969／j．issn．1000-484X．2011．12．009 从人源天然 ScFv噬菌体抗体库中筛选 A型肉毒毒素特异性抗体 毛晓燕 卢卫嘉 乔玉玲 熊 颖 张 超 马 瑞 (兰州生物制品研究所，兰州 730046) 中国图书分类号 Q81 文献标识码 A 文章编号 1000-484X(2011)12-1093-05 [摘 要] 目的：以不同形式的A型肉毒毒素或类毒素为靶抗原，对已经构建的人源天然scFv噬菌体抗体库进行特异性 抗体的筛选及特异性抗体的序列分析。方法：制备3种不同形式的A型肉毒毒素或类毒素，抗原梯度包被免疫管，对人源天 然ScFv噬菌体抗体库进行筛选 ，经过3轮 “吸附一洗脱一扩增”淘选富集 ，制备单克隆噬菌体抗体颗粒，用ELISA验证ScFv的结合 活性，并对获得的阳性克隆进行基因序列分析。结果：用3种不同形式的抗原进行筛选，各挑 180个克隆进行单克隆噬菌体抗 体颗粒的ELISA分析，其中以A型肉毒类毒素筛选获得52个阳性克隆，阳性率为28．8％，随机挑取 12个克隆测序，结果表明7 个scFv序列正确且各不相同；以纯化后A型肉毒神经毒素(BONT／A)筛选获得 18个阳性克隆，阳性率为 10％，测序结果表明 获得的 14个 scFv序列正确且各不不同；以原核表达的A型肉毒毒素重链C段筛选获得 122个阳性克隆，阳性率为68％，随机 挑取55个克隆测序，结果表明30个正确的scFv序列中14个系列完全相同，16个序列各不相同；结论 ：应用固相筛选的方法， 从人源天然 scFv噬菌体抗体库可以获得肉毒毒素特异性抗体，为抗肉毒毒素马血清的更新替换提供了研究依据与应用基础。 [关键词] 噬菌体抗体库 ；A型肉毒毒素；筛选 Screeninganti-botulinmntoxinantibodyfromhw naiveSeFv#agedisplaylibrary MAOXiao．Yah，LUWei—Jia，QIAOYu一，g!，XIONGYing，ZHANGChao，MARui．LanzhouInstituteofBiologicalPro- ducts，Lanzhou730046，China [Abstract] Objective：ToobtainspecificscFvfromhumannohveScFvphagedisplaylibrarywithdifferentformattypeAbotulinumtox— inortoxoid．M ethods：ThehumannaTveScFvphagedisplay librarywasplannedforthreeroundswithdifferentformatantigens．Theantigen bindingactivitiesofrandom clonesweretestedbyELISA inordertoselectspecieantibodies．Th esequenceofpartpositivecloneswere aria— Iyzed．Results：Random180cloneswhichwerepickedrespcetivelyfromthreedifferentofrmatantigenswerenaalyzed．FortypeAbotulinumtox- oid，52positivecloneswere gotten．Th epositiveratewasabout28_8％ ．Sequencenaalysisshowed7／12sequenceswerecorrectanddifferent． ForBONT／A，18positiveclonesweregotten．Th epositiverateWas about10％ ．Sequenceanalysisshowed14／18esuq enceswerecorrectand different．ForBONT／A—Hc，122positivecloneswere gotten．ThepositiverateWas about68％ ．Sequenceanalysisshowed30／55esquenceswere correct．14／30esquencesweresamenad16／30seuqenceswere different．Conclusion：W eCna getspecienatibodiesagainsttypeAbotuli