红皮梨花青苷调控基因PyMYBa的克隆与表达分析.doc

园 艺 学 报 2014，41（6）：1183–1190 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 收稿日期：2014–01–21；修回日期：2014–04–10 基金项目：国家自然科学基金项目 * 通信作者 Author for correspondence（E-mail：chenxs@；Tel：0538-8249338） 红皮梨花青苷调控基因PyMYBa的克隆与表达 分析 孙莎莎，王 楠，冀晓昊，冯守千*，张宪省，吴树敬，李 敏，王延玲， 陈学森* （山东农业大学园艺科学与工程学院，作物生物学国家重点实验室，山东泰安 271018） 摘 要：以红皮梨‘奥冠’为试材，采用RT-PCR结合RACE技术获得1个MYB基因，命名为PyMYBa。 该基因开放读码框共714 bp，编码237个氨基酸。PyMYBa分子量27.4 kD，等电点8.78。氨基酸序列分 析显示，在其N端具有保守的R2R3-MYB结构域，R3-MYB结构域含有bHLH结合基序。进化树分析表 明，PyMYBa与花青苷调控MYB转录因子的同源性很高。基因表达结果表明，PyMYBa在梨叶、花、果 皮中表达量明显高于果肉，果皮中的表达量与花青苷调控基因PyMYB10相比，无显著差异。遮光及MeJA 处理后果皮中PyMYBa、PyMYB10的表达量变化与花青苷合成量变化趋势相似，推测PyMYBa为梨花青 苷合成中重要的正向调控因子。通过原核表达试验获得了该基因的重组蛋白，SDS电泳检测结果与 预期蛋白分子量一致。 关键词：梨；花青苷；PyMYBa 中图分类号：S 661.2 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2014）06-1183-08 Cloning and Expression Analysis of an Anthocyanin-related Transcription Factor Gene PyMYBa in Pear SUN Sha-sha，WANG Nan，JI Xiao-hao，FENG Shou-qian*，ZHANG Xian-sheng，WU Shu-jing，LI Min， WANG Yan-ling，and CHEN Xue-sen* （College of Horticulture Science and Engineering，State Key Laboratory of Crop Biology，Shandong Agricultural University，Tai’an，Shandong 271018，China） Abstract：The 714 bp full length cDNA of PyMYBa gene was obtained using RT and RACE PCR from pear skins. The predicted protein of PyMYBa had 237 amino acids，with a calculated molecular mass of 27.4 kD and an isoelectric point of 8.78. The conserved R2R3 domain was observed in the N-amino terminus of PyMYBa. A signature motif specific for the interaction between MYB and bHLH proteins was observed in the R3 domain. Phylogenetic analysis revealed that PyMYBa is close with other MYB TFs involved in anthocyanin biosynthesis. Transcription analyses revealed that higher transcript levels of PyMYBa were in flower，leaf，fruit peel than in fruit flesh. In pear skins，the similar transcripts of PyMYBa and PyMYB