紫红线茄转基因体系的优化及基因SmARF8基因RNA干涉表达载体的遗传转化.doc

园 艺 学 报 2014，41（6）：1105–1114 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 收稿日期：2014–02–13；修回日期：2014–05–06 基金项目：浙江省新品种选育重大科技专项（2012C12903）；浙江省农业科学院创新提升工程项目（2012R23Y01E01） * 通信作者 Author for correspondence（E-mail：maowh@126.com） 紫红线茄转基因体系优化及SmARF8基因RNA 干涉表达载体的遗传转化 包崇来，杜黎明，胡天华，朱琴妹，胡海娇，毛伟海* （浙江省农业科学院蔬菜研究所，杭州 310021） 摘 要：建立了以紫红线茄下胚轴为外植体的高效转基因体系。利用该方法，以获得茄子SmARF8 基因RNA干涉转基因植株为目的，构建了以NPT基因为筛选标记的融合表达载体pCAMBIAI 35S-2300-SmARF8-INT，并通过农杆菌介导，侵染茄子下胚轴外植体。含有2 mg · L-1吲哚乙酸，0.5 mg · L-1 玉米素，25 mg · L-1卡那霉素和500 mg · L-1头孢氨苄的MS选择培养基可直接诱导外植体产生转基因分 化苗，再生率达到80%。转基因苗继续生长并在不含激素的MS培养基上产生健壮根系，最终获得转基 因株系。RT-PCR和qRT-PCR分析验证了T0代转基因株系中内源基因SmARF8被干涉后不表达或表达量 降低，Southern blot分析显示选择的T0代转基因株系中存在1个T-DNA插入拷贝。以上研究结果表明利 用建立的转基因体系SmARF8基因在茄子中被成功敲除。 关键词：茄子；转基因；RNA干涉；农杆菌 中图分类号：S 641.1 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2014）06-1105-10 Optimization of the Transgenic System and Genetic Transformation of SmARF8 Gene RNAi Vector in Red-purple Long Eggplant BAO Chong-lai，DU Li-ming，HU Tian-hua，ZHU Qin-mei，HU Hai-jiao，and MAO Wei-hai * （The Institute of Vegetable，Zhejiang Academy of Agricultural Sciences，Hangzhou 310021，China） Abstract：A high efficient genetic transformation system was developed using hypocotyl explants for producing transgenic red-purple long eggplant（Solanum melongena L.）. To generate SmARF8 gene RNAi transgenic eggplant plants，the binary vector pCAMBIAI 35S-2300-SmARF8-INT with the selectable marker gene neomycin phosphotransferase（NPT）was constructed and transformed into eggplant hypocotyl explants via Agrobacterium tumefaciens-mediated infection. Transgenic plantlets were induced on MS selective media containing 2 mg · L-1 indole-3-acetic acid，0.5 mg · L-1 zeatin，25 mg · L-1 kanamycin and 500 mg · L-1 cefotaxime with regeneration ratio higher to 80%. Subsequently，the transgenic plantlets kept growing on same medium and then rooted ef