胡萝卜愈伤组织培养论文.doc

胡萝卜愈伤组织的诱导 摘要: 植物组织培养的基础是利用细胞的全能性即指已经分化了的细胞仍然具有发育成完整个体的潜能，植物组织培养不仅能使处于分生状态的细胞继续保持分生能力,同时也可以使成熟组织中的细胞恢复分裂能力。了解胡萝卜的植物组织培养的基本概念、基本原理和操作方法知道分化的植物细胞仍具有形成完整植株所需要的全部基因。胡萝卜的植物组织培养主要研究不同的植物生长调节剂(2,4-D、6-BA)对胡萝卜脱分化形成愈伤组织速度的影响。实验表明在母液中加入6-BA(0.5mg/L)+ 2,4-D(1.0mg/L)的不如单独加入2,4-D(2.2 mg/L)形成愈伤组织的速度快,效果好。 关键词：胡萝卜；分化；愈伤组织；诱导 一、引言 植物组织培养新技术在快繁脱毒、育种、种质资源保存、次生代谢物提取、基因转化等方面有着良好的前景以及研究热点。在植物育种上的应用：单倍体育种，离体胚培养和体外受精，细胞融合，基因转化，培养细胞突变体、在植物脱毒和快速繁殖上、在人工种子和种质保存方面、在提取植物次生产物生产上、在植物免疫方面的皆能有其应用。在组织培养过程中，常会遇到一些问题使实验无法进行下去，甚至导致整个实验的失败，给科研和生产造成损失。如培养过程中的污染，褐变和玻璃化是组织培养中公认的三大难题。 胡萝卜营养价值高,及其适于生食、加工、烹调等多种用途,在世界范围内广泛栽培。从20世纪初到近几年，胡萝卜一直是科研人员的主要研究对象。20世纪50年代末Saward等人从胡萝卜根的韧皮部取下一块组织，并将它置于液体培养基中进行培养，使它分化出愈伤组织，然后把从愈伤组织所得到的胚状体转移到固体培养基上继续培养，获得了完整的胡萝卜试管植株。同一基因型的不同外植体其愈伤组织的发生能力有明显差异，这与不同外植体的分化程度和脱分化能力不同有关。近年来的研究表明，以胡萝卜下胚轴为外植体出愈率要高于子叶和贮藏根。 培养方法: 1、非试管微组织快繁 非试管微组织快繁技术是将外植体（一般要求带一叶一芽）放置在室内外普通沙子培养基上进行培养，利用植物腋芽自然倍增达到快速繁殖的目的。一般植物7～15天可以生长出根系。此技术投资低，操作环节少。 　　 2、试管组织培养 试管组织培养是将外植体（即离体组织、器官或细胞）放置在组培瓶等器皿中在无菌的条件下进行组织培养获得组培瓶苗。不同的激素种类、浓度及其组合对愈伤组织的诱导率有显著影响。在培养基中加入2,4-D,6-BA,BA,KT等，会影响胚性愈伤组织的发生。 由于条件有限，我们选取的是第二种方法。 植物组织培养首先不仅可以生产大量良性系，而且可以获得人类需要的多种代谢物质；其次，细胞融合可打破种属间的界限，客服远缘杂交不亲和性障碍，在植物新品种的培养和种性的改良中发挥着巨大的作用；再次，还可获得单倍体，三倍体及其他多倍体，非整倍体;最后，组织培养的植物细胞液成为在细胞水平上分析研究的理想材料。 二.材料和方法 （一）试剂器材 ①实验材料: 胡萝卜直根。 ②试剂：MS培养基，2,4-D，6-BA，无菌水，70%酒精，5%次氯酸钠溶液，吐温 ③器材：耗材：培养皿，锥形瓶，棕色试剂瓶，滤纸，镊子，解剖刀，烧杯，量筒，玻璃棒，酒精灯，移液管，移液枪，容量瓶，离心管。 仪器：超净台，高压灭菌锅，pH测定仪。 （二）方法 ①MS培养基的配制（1L） 母液I ，MS扩大200倍定容于250ml容量瓶中，配1L培养基取5ml。 H3BO3??? 0.31g KH2PO4 8.5g KI? 0.0415g Na2MoO4·2H2O 0.0125g CoCl2·6H2O? 0.00125g 母液II，MS扩大200倍定容于250ml容量瓶中，配1L培养基取5ml。 MgSO4·7H2O 18.5g MnSO4·H2O 0.845g ZnSO4·7H2O 0.43g CuSO4·5H2O 0.00125g 母液Ⅲ ，MS扩大200倍定容于250ml容量瓶中，用棕色试剂瓶装。配1L培养基取5ml。 Na2-EDTA·2H2O? 1.865g FeSO4·7H2O 1.39g 母液Ⅳ，MS扩大40倍定容于250ml容量瓶中，配1L培养基取25ml。 ?KNO3 19g 母液Ⅴ，MS扩大40倍定容于250ml容量瓶中，配1L培养基取25ml。 ?NH4NO3? 16.5g 母液Ⅵ，MS扩大40倍定容于250ml容量瓶中，配1L培养基取25ml。 无水CaCl2 3.3224g 其他有机物母液： 称取量(g) 定容到(ml) 浓度（mg/ml） 配1L培养基用量（ml） 肌醇B6 0.05 100 0.5 1 VB1 0.01 100 0.1 1 甘氨酸 0.2 100 2 1