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花粉培养 安科院 园艺121班 这张已隐藏,播放时不可见^_^ 花粉培养 也叫小孢子培养，是指把花粉从花药中分离出来，以单个花粉粒作为外植体进行的离体培养技术 包含花粉的花药 花粉培养产生植株的途径 花粉 脱分化 胚状体 愈伤组织 再分化 植株 植株 花粉培养的优点 花粉已是单倍体细胞，诱发后经愈伤组织或胚状体发育成的小植株都是单倍体植株或双单倍体，不含有因药壁、花丝、药隔等体细胞组织的干扰而形成的体细胞植株 由于起始材料是小孢子，获得的材料总是纯合的，不管它是二倍体还是三倍体 小孢子培养可观察到由单个细胞开始雄核发育的全过程，是一个很好的遗传与发育研究的材料体系 由于花粉能均匀地接触化学的和物理的诱变因素，花粉是研究吸收、转化和诱变的理想材料 一、分离花粉的方法 1.自然释放法 2.研磨过滤收集法 3.剖裂释放法 1.自然释放法 将花蕾进行表面消毒后，无菌条件下取出花药，放在固体或液体培养基上培养，花药会自然开裂，将花粉散落在培养基上。然后将花药壁等去除，即可进行花粉培养。 花蕾 消毒 灭菌 花药 固体培养基 液体培养基 裂开，花粉散落 移走花药 花粉培养 花粉散落 过滤 离心 浓缩 接种培养 操作简单，但效率低 2.研磨过滤收集法 将花蕾表面消毒后，放入含培养基或分离液的无菌研磨器中研磨，使花粉释放出来，然后通过一定孔径的网筛过滤、离心，收集花粉并用培养基或分离液洗涤，然后用培养基将花粉调整到理想的接种密度，移入培养皿进行培养。 消毒花蕾 无菌研磨 器研磨 花粉+碎片混合物 花粉滤液 离心 花粉沉淀物 洗涤 花粉培养 筛网过滤 3.剖裂释放法 这一技术需要借助一定工具剖裂药壁，使花粉释放出来，而不是自然释放。 zhe li de wen zi yi dian yi yi dou mei you yin wei kong bai chu tai duo le suo yi jiu xie dian shen me 二、花粉培养方法 1.液体浅层培养 2.平板培养法 3.看护培养法 4.微室悬滴培养法 5.条件培养法 1、液体浅层培养 分离的小孢子经洗涤纯化，调整到所需浓度，根据培养皿的大小，适量加入培养皿内进行培养。待愈伤组织或胚状体形成后转移到分化培养基或胚发育的培养基上使其生长。 zhe li de wen zi ye mei you yi yi yin wei zhao bu dao he shi de tu pian suo yi zhi neng xie xie wen zi le 2、平板培养法 将分离的花粉用液体培养基稀释或离心浓缩到最终接种密度的2倍，把含0.6%到1%的琼脂的培养用固体培养基加热熔化后，冷却到35℃，置于恒温水浴锅中保持这个温度不变。然后将这种培养基与花粉培养液等量混合，迅速注入并使之铺展在培养皿内。用封口膜把培养皿封严，最后将材料放在25℃下进行暗培养，诱导产生胚状体或再生不定芽，并进而分化成小植株。 稀释 花粉悬浮液 离心浓缩 含有2倍培养密度的花粉悬浮液 等体积混合 含有单倍培养密度的花粉培养液 固培 加热熔化 冷却至35℃ 加封口膜 25℃暗培养 花粉平板培养示意图 3、看护培养法 将完整的花药放在固体培养基上，然后将滤纸片放置在花药上面，一会滤纸就被湿润，然后迅速将花粉放置在滤纸片上，进行培养。对照是把花粉粒直接放置在固体培养基上，其它操作相同。 4、微室悬滴培养法 把花序取下，表面消毒后用塑料薄膜包好，静置一夜，待花药裂开、花粉散出，制成每滴含有50到80粒的花粉悬浮培养基，然后放在微室内进行悬滴培养。 花药消毒 静置一夜 花药裂开 花粉散落 收集 悬浮 悬浮液 50~80粒/滴 1滴 无菌 载玻片 加石蜡 “围墙” 两侧加石蜡油，放盖片形成“支柱” 盖片架于“支柱”之上形成“屋顶” 微室制作方法