葡萄白粉病菌应答基因VpSTART的克隆及表达分析.doc

园 艺 学 报 2014，41（6）：1080–1088 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 收稿日期：2014–01–17；修回日期：2014–05–28 基金项目：国家自然科学基金项目；陕西省重点科技创新团队葡萄种质资源与育种应用项目（2013KCT-25） * 通信作者 Author for correspondence（E-mail：wangxiping@） 葡萄白粉病菌应答基因VpSTART的克隆及表达 分析 闫筱筱1，侯鸿敏2，焦 晨1，王西平1,3,* （1西北农林科技大学园艺学院，旱区作物逆境生物学国家重点实验室，陕西杨凌 712100；2青岛农业大学园艺学院， 山东青岛 266109；3农业部西北地区园艺作物生物学与种质创制重点开放实验室，陕西杨凌 712100） 摘 要：在前期获得葡萄白粉病菌应答基因VpSTART的EST基础上，采用RACE和RT-PCR技术克 隆该基因cDNA全长序列。VpSTART全长1 321 bp，3′端非编码区114 bp，包含一个1 206 bp开放阅读框， 编码401个氨基酸。VpSTART蛋白分子量为45.3 kD，与欧亚种葡萄、玉米、拟南芥、蒺藜状苜蓿和蓖 麻的蛋白同源性分别为99%、64%、58%、46%和25%。实时荧光定量PCR表明，VpSTART在‘商–24’ 葡萄花序、卷须和茎中表达量较高；感白粉病的‘湖南–1’葡萄叶片接种白粉病菌后VpSTART表达量与 对照没有显著差异，而抗白粉病的‘商–24’葡萄接种12 h后VpSTART表达量增加，在24 ~ 96 h表现显 著性差异；用SA、MeJA和Eth等不同信号分子分别处理‘湖南–1’和‘商–24’葡萄叶片1 ~ 48 h后， VpSTART基因的表达受SA负调控，受MeJA和Eth正调控。 关键词：葡萄；白粉病菌；VpSTART；基因克隆；表达分析 中图分类号：S 663.1 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2014）06-1080-09 Cloning and Expression Analysis of Powdery Mildew Fungus Responsive Gene VpSTART in Grape YAN Xiao-xiao1，HOU Hong-min2，JIAO Chen1，and WANG Xi-ping1,3,* （1College of Horticulture，State Key Laboratory of Crop Stress Biology in Arid Areas，Northwest A F University， Yangling，Shaanxi 712100，China；2College of Horticulture，Qingdao Agricultural University，Qingdao，Shandong 266109， China；3Key Laboratory of Horticultural Crop Biology and Germplasm Development in Northwest China，Ministry of Agriculture，Yangling，Shaanxi 712100，China） Abstract：Based on previous EST sequence of grape powdery mildew fungus responsive gene VpSTART，a full-length cDNA sequence was cloned through RACE and RT-PCR technologies in this study. The full-length cDNA of VpSTART was 1 321 bp with 114 bp 3′UTR，contained a 1 206 bp open reading frame encoding 401 amino acids residues. VpSTART protein showed a calculated molecular weight of 45.3 kD，and shared 99%，64%，58%，46%