黄曲霉毒素的检测及防控.ppt

黄曲霉毒素的检测及防控 Analysis and Control of Aflatoxins 内 容 黄曲霉毒素的概述 黄曲霉毒素的国际限量要求 黄曲霉毒素的检测 黄曲霉毒素污染的预防和控制 山东局技术中心黄曲霉毒素实验室 输欧花生黄曲霉毒素实验室检测 一、黄曲霉毒素概述 黄曲霉毒素的研究历史 黄曲霉毒素的毒理作用 黄曲霉毒素的产生 黄曲霉毒素的分布 黄曲霉毒素的化学性质 研究历史 1960年, 英国10万只火鸡死亡事件揭开了人们对于黄曲霉毒素的认识与研究。 火鸡的死亡与饲料中含有较高浓度的黄曲霉毒素有关。 用这种饲料（花生粉）对动物进行急性毒理实验后，证明具有强毒性。对大白鼠进行长期的慢性中毒实验后，成功地诱发了肝癌。 对毒饲料进行提取，得到了黄曲霉毒素。 在随后的几十年中，黄曲霉毒素得到了科学界的高度重视。 黄曲霉毒素的毒理作用 黄曲霉毒素是潜在的肝脏毒素。当大剂量摄入这些毒素时可能是致命的。亚致死剂量会导致慢性中毒，而低剂量的长期接触则会致癌，特别是导致肝癌。通常，动物幼仔比成年动物更加容易遭受黄曲霉毒素的毒害。 黄曲霉毒素引起了人们对健康最强烈的关注，是因为其广泛分布于一些食物诸如花生、坚果、牛奶、玉米中，同时也是人类潜在的致癌原。 黄曲霉毒素的产生 黄曲霉毒素主要由黄曲霉和寄生曲霉等在代谢过程中产生。 黄曲霉毒素产生的条件：菌株的产毒能力、适宜的湿度（80%-90%相对湿度和基质的含水量）、温度（24-30度）、氧气（1%以上）、培养时间、机械损伤、昆虫损害等。 黄曲霉毒素的分布 黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2大多分布在农产品中，常见的有花生、玉米、棉籽、芝麻、杏仁、辣椒等。 黄曲霉毒素M1分布在牛奶及奶制品中。 在哺乳动物的肝脏与尿中发现了黄曲霉毒素P1和Q1。 黄曲霉毒素的化学性质 黄曲霉毒素是结果相近的一群衍生物。化学结构式为二呋喃环和香豆素。在紫外线下，黄曲霉毒素B1、B2发兰色荧光，黄曲霉毒素G1、G2发绿色荧光。 黄曲霉毒素的分解温度为237-299度，一般加热不能破坏其毒性。 在有氧条件下，紫外线照射可去毒。 难溶于水，易溶于油、甲醇、丙酮和氯仿等有机溶剂，但不溶于石油醚、己烷和乙醚中。一般在中性及酸性溶液中较稳定，在强碱溶液下易分解 二、黄曲霉毒素的国际限量 Codex EU 黄曲霉毒素B1/总量 花生、坚果、干果： 2/4ppb 花生（进一步挑选等）：8/15ppb 坚果、干果（进一步挑选）：5/10ppb 谷物及加工产品：2/4ppb 各种调味品：5/10ppb 澳大利亚、新西兰 黄曲霉毒素总量： 花生：15ppb 美国 所有食品： 黄曲霉毒素总量 20ppb 黄曲霉毒素的中国限量 玉米、花生、花生油、坚果等 B1不得超过20ppb。 大米、其他食用油等B1不得超过10ppb。 其它粮食（麦类、面粉、薯干）、发酵食品（酱油、醋等）、淀粉类制品（糕点、饼干、面包等） B1不得超过5ppb。 牛奶及其制品中M1不得超过0.5ppb。 三、黄曲霉毒素的检测 黄曲霉毒素的检测，从广义上，包括：采样、制样和检测三个过程。 黄曲霉毒素的检测一直是困扰世界各国的难题。原因：不均匀分布；ppb水平 检测程序analytical procedure 采样 sampling 目的：得到一个有代表性的样品 困难：1）分布不均匀 2）ppb水平 办法：尽量加大采样点和采样量，使货物的每个部位都有同等的机会被抽到。 均匀分布（如蛋白质） 不均匀分布（黄曲霉毒素） 所谓“ppb” 1，000，000，000中的1分子 32年中的1秒 地球至月球总距离中的40cm 22公斤沙子中的1粒 3.5车厢中的1粒玉米 检测误差 Errors in Analysis 样品制备 sample preparation 目的：将样品充分粉碎、均质化，为下一步检测做准备 办法：使用高效粉碎机，粉碎最终直径小于2mm 制样误差约占总误差的10% 分析检测 test 提取extraction 净化purification 分析analysis 分析程序----净化 净化是指去除提取液中的杂质（如脂肪、蛋白质、色素等），以避免对黄曲霉毒素的检测造成干扰。 几种常用的净化方法 免疫亲和柱 (IAC)净化 固相萃取柱（SPE）净化 液-液萃取 其他 黄曲霉毒素的分析方法 快速筛选法： 荧光光度计法 ELISA法 确证方法： HPLC-FLD法 免疫亲和柱净化-荧光光度计法 原理：紫外线照射后，黄曲霉毒素能发射特征荧光 优点： 1、操作简便、安全 2、检测限小于2ppb 缺点：有假阳性的存在 酶联免疫法 原理：利用