菌落总数检验操作规程.docVIP

菌落总数检验操作规程 颁发 部门 质量部 新订■修订□复审□ 页数 共2页 文件性质 管理标准■操作标准□ 技术标准□ 文件编码 原编编码 起 草 年 月 日 审核 年 月 日 批准 年 月 日 Q 年 月 日 执行日期 年 月 日 分发 部门 质量管理部、QC 目的 建立检验的标准操作程序，使操作过程规范化。 适用范围 适用于的检验操作。 职责 检验人员 严格按检验操作规程进行检验。 QC主管 监督检查执行情况。 程序 图1 菌落总数的检验程序 6.操作步骤 6.1 样品的稀释 6.1.1 固体和半固体样品：称取 25 g 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有 225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min，制成 1:10 的样品匀液。 6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10 的样品匀液 6.1.3用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有 9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成 1:100 的样品匀液。 6.1.4 按 6.1.3 操作程序，制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用 1 次1 mL 无菌吸管或吸头。 6.1.5根据对样品污染状况的估计，选择 2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行 10 倍递增稀释时，吸取 1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取 1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。 6.1.6及时将 15 mL～20 mL 冷却至 46 ℃的平板计数琼脂培养基（可放置于 46℃ ±1 ℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。 6.2培养 6.2.1待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃ ±1 ℃培养48 h±2 h。水产品 30℃±1 ℃培养 72 h±3 h。 6.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约 4 mL），凝固后翻转平板，按 6.2.1 条件进行培养。 6.3 菌落计数 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。 6.3.1 选取菌落数在 30 CFU～300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于 30 CFU的平板记录具体菌落数，大于 300 CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 6.3.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。 6.3.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数 7.结果与报告 7.1菌落总数的计算方法 7.1.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每 g（mL）样品中菌落总数结果。 7.1.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按以下公式计算： N ∑C n1+0.1n2 d 式中： N——样品中菌落数； C——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和； n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数 n2—— 第二稀释度（高稀释倍数）平板个数 d——稀释因子（第一稀释度）. 7.1.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于 300 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。 7.1.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于 30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 7.1.5 若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于 乘以最低稀释倍数计算。 7.1.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU～300 CFU之间，其中一部分小于30 CFU或大于300 CFU时，则以最接近 30 CFU或 300 CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计 7.2菌落总数的报告 7.2.1菌落数小于 100 CFU时，按“ 四舍五入”原则修约，以整数报告。 7.2.2菌落数大于